[发明专利]一种AR-V7表达检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种AR‑V7表达检测试剂盒，其包括包括针对检测AR‑V7mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括有扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针；其中，所述捕获探针为茎环状，用于连接目标mRNA与扩增探针；所述扩增探针连接捕获探针与标记探针，所述标记探针连接扩增探针与荧光基团，每条标记探针具有与相应扩增探针P4序列互补配对的P5序列，且末端修饰有荧光基团。本发明所述检测试剂盒，具有特异性高、信噪比高、准确率高等优点。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种AR-V7表达检测试剂盒。

背景技术

前列腺癌是一种发生在前列腺的上皮恶性肿瘤，是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其发生受到多种因素的影响，包括年龄、种族、生活习惯、肥胖以及家族病史等。据统计，2012年我国肿瘤登记地区前列腺癌发病率为9.92/10万，列男性恶性肿瘤发病率的第6位。前列腺癌是雄激素依赖性的肿瘤，雄激素可促进前列腺癌细胞的增殖，通过内分泌疗法降低体内的雄激素水平或拮抗其作用可抑制肿瘤细胞生长，促进其凋亡，因此，内分泌治疗是临床中晚期前列腺癌的首选疗法。然而，经过中位时间为18-24个月的内分泌治疗后，几乎所有的患者终将进展至激素抵抗阶段，即去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)，预后较差。CRPC是前列腺癌治疗领域的共性难题，目前尚缺乏可供临床应用的预测前列腺癌进展至CRPC的分子标志物。

雄激素在前列腺癌的发生和发展中发挥着至关重要的作用，其与胞质中的雄激素受体(androgen receptor,AR)结合进入胞核后发挥生物学作用。目前研究已发现多种AR剪接变异体，这些处于激活状态的AR剪接变异体可能是导致前列腺癌进展至CRPC的重要因素。其中AR-V7(雄激素受体剪接变异体7)是研究最广泛且在前列腺癌中表达最高的剪接变异体之一。众多研究结果显示，AR-V7的表达可作为激素敏感时间的独立且最强的预测因子。因此，对前列腺癌患者体内AR-V7的表达进行检测不仅可以指导患者用药，更是一个潜在的治疗靶点。目前对AR剪接体的检测方法主要包括PCR、PCR-SSCP、Northern blot和免疫组织化学法等，这些方法均无荧光信号放大系统，一定程度上限制了检测的灵敏度和准确性。而目前利用探针直接检测AR-V7的原位杂交法中，选用的探针均为线性寡核苷酸探针，不能区分两端几个碱基的差异，存在非特异性杂交；且在探针杂交过程中，难以避免探针分子与基质本身(如滤膜)的非特异性结合，从而造成一定的荧光背景，降低信噪比和灵敏度。为此，急需提供一种灵敏度好、特异性强、准确率高、信噪比高的AR-V7检测探针和方法，对前列腺癌患者体内的的临床治疗提供AR-V7进行检测，帮助医生制定更好更有效的治疗方案。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏度高、特异性强、准确率高、信噪比高的AR-V7表达检测试剂盒，用于检测前列腺癌患者生物样本中AR-V7的表达水平，指导临床治疗。

实现上述目的的技术方案如下：

一种AR-V7表达检测试剂盒，包括针对检测目标mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述目标mRNA为AR-V7；所述信号放大系统包括有扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针；其中，

所述捕获探针为茎环状，用于连接目标mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：茎部结构序列、能与待检测目标mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、P2序列，所述茎部结构序列可与P2序列3’端的碱基互补形成茎环结构，所述P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和R-V7mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

所述扩增探针连接捕获探针与标记探针，每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与茎环状捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3和目标mRNA之间均不存在特异性结合的序列；