[发明专利]一种特异性标记家蚕微孢子虫的核酸探针及其原位荧光杂交检测方法

权利要求书

1.一种特异性标记家蚕微孢子虫的核酸探针，其特征在于，核酸探针序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

2.含有权利要求1所述核酸探针的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针由核酸探针和荧光染料组成，所述荧光染料结合在核酸探针的5’端或3’端。

3.根据权利要求2所述的荧光探针，其特征在于，所述荧光染料为Cy3、Cy5、FITC、FAM、Alexa Fluor 488或Biotin。

4.根据权利要求2所述的荧光探针，其特征在于，所述荧光染料为Cy3。

5.利用权利要求2所述的荧光探针特异性标记家蚕微孢子虫的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述荧光原位杂交方法为以下步骤：

(1)用多聚甲醛对感染家蚕微孢子虫的细胞进行固定，所述荧光探针用杂交液进行稀释至终浓度为3～5ng/μL，于46℃进行杂交，杂交10～12小时，再用杂交清洗液清洗非特异性结合的探针，于48℃清洗1～4小时；

(2)用100ng/μL DAPI对细胞的细胞核以及家蚕微孢子虫的细胞核进行标记，18～25℃染色30min，PBS清洗，封片，再用荧光显微镜，选取相应的激发波长观测荧光探针标记结果。

6.根据权利要求5所述的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述细胞为家蚕胚胎细胞、家蚕卵巢细胞或草地贪夜蛾细胞。

7.根据权利要求5所述的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述细胞为家蚕胚胎细胞。

8.根据权利要求5所述的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述多聚甲醛的质量浓度为4％；杂交液为含有900mM NaCl,20mM Tris,0.01％SDS,PH值为7.5的水溶液；所述杂交清洗液为含有900mM NaCl,20mM Tris，0.01％SDS,5mM EDTA,PH值为7.5的水溶液。

9.根据权利要求5所述的荧光原位杂交方法，其特征在于，所述PBS清洗是用PBS清洗1～5次，每次5～10分钟。