[发明专利]一种小黄鱼和大黄鱼幼鱼的PCR鉴定方法及引物在审
| 申请号： | 201710204070.2 | 申请日： | 2017-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN106884053A | 公开（公告）日： | 2017-06-23 |
| 发明（设计）人： | 刘洋;蔡珊珊;韩志强 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司33109 | 代理人： | 尉伟敏,赵越剑 |
| 地址： | 316022 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 小黄鱼 大黄鱼 幼鱼 pcr 鉴定 方法 引物 | ||
1.一种小黄鱼和大黄鱼幼鱼的PCR鉴定方法，其特征在于，所述PCR鉴定方法步骤为：提取样品的基因组DNA，采用鉴定引物对提取的DNA进行PCR扩增，PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测，出现一条扩增条带的为小黄鱼，出现两条扩增条带的为大黄鱼；所述鉴定引物序列如下：
COI-F：5’-GTTACGGCACATGCYTTCGT-3’
COI-R1：5’-GGAAACACCTGCGAGGTGTA-3’
COI-R2：5’-TARAGGATGGGATCGCCTCC-3’。
2.根据权利要求1所述的PCR鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增体系为：所述PCR扩增体系为：10×buffer 2.5μl，dNTP 2μl，COI-F 1μl，COI-R1 1μl，COI-R2 1μl，Taq酶0.15μl，DNA模板1μl，ddH2O补足体系至25μl。
3.根据权利要求2所述的PCR鉴定方法，其特征在于，dNTP的终浓度为0.8mM，COI-F的终浓度为1μM，COI-R1的终浓度为1μM，COI-R2的终浓度为1μM，Taq酶终浓度为0.04U/μl。
4.根据权利要求1或2所述的PCR鉴定方法，其特征在于，所述PCR扩增条件为：94℃预变性3min，后经过40个循环，每个循环包括94℃45s，50℃45s，72℃45s；最后72℃延伸10min。
5.一种用于鉴定小黄鱼和大黄鱼幼鱼的引物，其特征在于，包括三条特异性引物，引物序列如下：
COI-F：5’-GTTACGGCACATGCYTTCGT-3’
COI-R1：5’-GGAAACACCTGCGAGGTGTA-3’
COI-R2：5’-TARAGGATGGGATCGCCTCC-3’。
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