[发明专利]改善蛋白质生物利用度及难溶药物水溶性的载体及制法

说明书

技术领域

本发明涉及一种构建联合装载蛋白质药物和疏水药物的载体及制备方法，特别涉及一种构建联合装载蛋白质药物和疏水药物抗肿瘤的控制释放体系及方法。

背景技术

近年来，聚合物分子刷在生物医学领域显示了广阔的应用前景，如药物载体、基因载体、蛋白质载体和生物传感系统等。蚓激酶是一类具有抗血栓、抗氧化、抗肿瘤和免疫调节作用的酶复合物，已被广泛研究并用于临床抗肿瘤治疗。但蚓激酶的体内半衰期短，生物利用度低，且毒副作用大，因而大大限制了其临床应用。聚乙二醇化可有效提高蚓激酶的半衰期，但聚乙二醇化反应增加了制备难度且易降低其生物活性；另一方面，常将蚓激酶与其药物(化疗药物或中药)联合使用以降低蚓激酶剂量，减少毒副作用且提高抗肿瘤效果。

为适应药物载体领域的发展要求，制备生物相容、生物可降解以及靶向药物载体已经成为新的发展趋势。

蛋白质药物可以通过静电作用装载到胶束内，装载可以在温和的水溶液条件下进行，装载效率可达到100％。同时，调节胶束的结构，可实现胶束在光照、不同pH环境和糖存在等条件下发生解离达到蛋白质药物的缓释和控释。但是，胶束的一大缺陷是蛋白质药物装载量和装载稳定性低。胶束装载蛋白是利用胶束和蛋白质药物的静电作用，所以蛋白质药物的装载量和稳定性受胶束电荷密度和蛋白质药物电荷密度及介质盐浓度的作用。提高盐浓度，胶束与蛋白质药物间的静电作用减弱，蛋白质药物装载量和稳定性下降。据文献报道，胶束对蛋白质的装载量大多低于10％(蛋白质与胶束质量百分比)。提高胶束(或蛋白质药物)的电荷密度和交联胶束可以提高蛋白质药物装载量和稳定性。

发明内容

本发明提供一种改善蛋白质生物利用度及难溶药物水溶性的载体，以解决目前存在的蛋白质生物利用度低、疏水药物的水溶性差的问题。

本发明采取的技术方案是，由下列步骤得到的：

(1)聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯嵌段共聚物PEG-b-PBLG的合成；

(2)PEG-b-PBLG氨解产物PEG-b-PELG的合成；

(3)线性聚乙二醇-刷状聚苄氧羰基赖氨酸嵌段共聚物PEG-b-(PELG-g-PZLL)的合成；

(4)线性聚乙二醇-刷状聚苄氧羰基赖氨酸和聚赖氨酸嵌段共聚物PEG-b-(PELG-g-(PZLL-r-PLL))的合成；

所述步骤(1)包括下列步骤：

1.1制备谷氨酸酸酐和赖氨酸酸酐：其中谷氨酸酸酐制备：在装有6g BLG及0.09g活性炭的三颈烧瓶中加入150-200mL乙酸乙酯，40-50℃油浴，待乙酸乙酯回流后加入干燥过的1.32-1.40g三光气，1小时后加入干燥过的0.16-0.21g三光气，2小时后反应体系中的白色BLG固体消失，反应完全；将溶液转至冷冻过的分液漏斗，用冷藏的饱和NaHCO₃溶液和饱和NaCl溶液分别洗涤3次；滤液旋转蒸发，浓缩至60-80mL，加入石油醚100-150mL，析出白色沉淀，抽滤后滤渣真空干燥1小时得到白色固体为粗产物；粗产物用乙酸乙酯20-30mL和石油醚6-10mL重结晶3次，抽滤得到白色晶体；赖氨酸酸酐制备：在装有5g ZLL及0.11g活性炭的三颈烧瓶中加入110-200mL乙酸乙酯，40-50℃油浴，待乙酸乙酯回流后加入干燥过的1.16-1.21g三光气，2小时后反应体系中的白色ZLL固体消失，反应完全；将溶液转至冷冻过的分液漏斗，溶液用冷藏的饱和NaHCO₃溶液和饱和NaCl溶液分别洗涤3次，滤液旋转蒸发浓缩至50-60mL，加入石油醚100-150mL沉淀析出，滤渣真空干燥得到的白色固体为粗产物；粗产物用乙酸乙酯20-30mL和石油醚6-10mL重结晶3次，抽滤得到白色晶体；

1.2用步骤1.1得到的谷氨酸酸酐制备聚乙二醇-聚谷氨酸苄酯嵌段共聚物PEG-b-PBLG：称取0.37g的PEG-NH₂于80-100mL反应瓶，4-6mL二甲基甲酰胺DMF溶解，加入0.37g的BLG-NCA/DMF溶液；25-30℃下搅拌反应2天；在反应体系中加入超纯水，并转移到透析袋对水透析2天，冷冻干燥得到嵌段共聚物PEG-b-PBLG；