[发明专利]一种诊断骨性关节炎的miRNA分子标志物及一种骨性关节炎检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术诊断领域，特别是涉及一种诊断骨性关节炎的miRNA 分子标志物及一种骨性关节炎检测试剂盒。

背景技术

骨关节炎(Osteoarthritis，OA)是一种慢性退行性关节病变，本病发病率随年龄的增长而增加，是一种中老年人常见的关节疾病。OA的发病因素众多，发病机制十分复杂，其中OA特征性的表现是软骨细胞基质合成不足、关节软骨退变、骨赘形成和滑膜病变。虽然目前有很多学说通过解释OA的形成机理，建立了一些诊断和治疗OA的方法，但这些诊断OA的手段主要还是以影像学检查为基础。目前在临床影像学辅助检查(X线、MRI及超声等)确诊OA时，关节软骨已经出现了不可逆性损伤,这就使得临床在对OA进行早期干预或治疗时没有一种良好的改变或延缓病情的治疗措施。如何早期诊断OA成为延缓及控制骨关节炎进展的关键。

MiRNA是广泛存在于真核生物中的单链小分子RNA，其不编码蛋白质，但可在转录后调控基因表达，影响蛋白质的翻译，参与机体各种重要的生理和病理过程。随着科学界对miRNA在调控细胞功能方面的研究日渐加深以及新的 miRNA作用靶标的发现，越来越多的研究证实，miRNA可在多方面调控OA软骨相关基因的表达。其中，miR-140是在正常软骨中特异性表达的少数几个 miRNA之一，敲除小鼠体内的miR-140基因后，小鼠表现出与OA类似的病理过程，表现出软骨蛋白多糖的减少和关节软骨的纤维化。关节软骨的营养来源于滑液的渗透，关节软骨与关节滑液之间存在一定的物质交换；与血液和尿液相比，关节液成分及量的变化更能反映关节内组织病变的发生和发展。因此，找寻一种miRNA分子标志物，通过检测关节液中的该分子标志物的表达量来诊断 OA的严重程度，可为骨关节炎的早期诊断和治疗提供重要依据。

发明内容

鉴于此，本发明提供了一种诊断骨性关节炎的miRNA分子标志物，通过检测该分子标志物在关节液中的表达量，可获知骨关节炎病程的进展，从而为骨关节炎的早期诊断和治疗提供依据。

具体地，第一方面，本发明提供了一种诊断骨性关节炎的miRNA分子标志物，所述miRNA分子标志物包括miRNA140-3p。

所述miRNA140-3p的序列为：uaccacaggguagaaccacgg。

本发明第一方面提供的miRNA分子标志物为骨关节炎的诊断提供了新的生物标志物，通过检测关节液中miRNA140-3p的表达量，可初步判断骨关节液的严重程度，灵敏度和特异性高。通过采用本发明的miRNA分子标志物进行骨性关节炎的诊断，具体具有如下优势：(一)无创：对病人的损伤较小，能够克服创伤性检测带来的风险；(二)稳定：在临床血清、血浆、关节液样本中， microRNA以抵抗RNA酶的形式稳定存在；(三)早期：microRNA在疾病早期阶段就已经表现出异常，因此可以用于高危人群的预警或者早期检测；(四) 简便：采用qPCR进行检测，操作简单、灵敏度高、样本需求量少，检测周期短，仅需数小时便可获取结果，价格低廉。

相应地，本发明第二方面提供了一种骨性关节炎检测试剂盒，包括：

(1)miRNA分子标志物，所述miRNA分子标志物包括miRNA140-3p；

(2)提取RNA试剂：Trizol裂解液、氯仿、SiO₂吸附液、乙醇、DEPC H₂O；

(3)逆转录试剂：5×buffer、10mmol/L脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、 M-MLV逆转录酶、RNase inhibitor(RNase抑制剂)、microRNA140-3p逆转录引物、内参U6逆转录引物、DEPC H₂O；

(4)荧光定量PCR试剂：SYBR Green qPCR SuperMix、microRNA140-3p 特异性前向引物、microRNA140-3p特异性后向通用引物、内参U6扩增引物、 DEPC H₂O。

其中，所述microRNA140-3p特异性前向引物(Forward primer)的基因序列为5’-ACA CTC CAG CTG GGA GGC GGG GCGCCG CGG GA-3’。

所述microRNA140-3p特异性后向引物(Reverse primer)的基因序列为 5’-CTC AAC TGG TGT CGT GGA-3’。