[发明专利]一种RNA恒温扩增熔解曲线法检测临床常见致病细菌的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种RNA恒温扩增熔解曲线法检测临床常见致病细菌的引物和分子信标探针，其特征在于，包括如下序列：

正向引物F1：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

反向引物R1：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

正向引物F2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

反向引物R2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

分子信标探针P1：其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

分子信标探针P2：其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

分子信标探针P3：其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

所述分子信标探针P1，其寡核苷酸DNA分子的5’端标记荧光报告基团CY5，3’端标记荧光淬灭基团DABCYL；

所述分子信标探针P2，其寡核苷酸DNA分子的5’端标记荧光报告基团HEX，3’端标记荧光淬灭基团DABCYL；

所述分子信标探针P3，其寡核苷酸DNA分子的5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团DABCYL；

所述的临床常见致病细菌包括： 大肠埃希菌、粪肠球菌、鲍曼不动杆菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、棒状杆菌、洋葱伯克霍德菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌。

2.权利要求1所述RNA恒温扩增熔解曲线法检测临床常见致病细菌的引物和分子信标探针在制备检测临床常见致病细菌检测试剂中的应用。

3.一种RNA恒温扩增熔解曲线法检测临床常见致病细菌的试剂盒，其特征在于，包括如下试剂：2×恒温扩增反应液、5×酶混合液；

所述2×恒温扩增反应液包含有：如权利要求1所述的正向引物F1和反向引物R1、正向引物F2和反向引物R2，如权利要求2所述的分子信标探针P1、P2和P3。

4.根据权利要求3所述RNA恒温扩增熔解曲线法检测临床常见致病细菌的试剂盒，其特征在于，

2×恒温扩增反应液包括如下组分：Tris-HCl pH8.0 80 mM、KCl 140 mM、MgCl₂ 24 mM、DTT 10 mM、dNTP 2 mM、NTP 4mM、甜菜碱2M、体积分数为30% 的DMSO、正向引物F1 0.4 μM、反向引物R1 0.4 μM、正向引物F2 0.4 μM、反向引物R2 0.4 μM、分子信标探针P1 0.05 μM、分子信标探针P2 0.05 μM、分子信标探针P3 0.1 μM。

5.根据权利要求3所述RNA恒温扩增熔解曲线法检测临床常见致病细菌的试剂盒，其特征在于，所述5×酶混合液包括如下组分：M-MLV 20U/μl、T7 RNA聚合酶 100 U/μl、BSA10.5 μg/μl。

6.根据权利要求3所述RNA恒温扩增熔解曲线法检测临床常见致病细菌的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括空白对照。

7.根据权利要求6所述RNA恒温扩增熔解曲线法检测临床常见致病细菌的试剂盒，其特征在于，所述空白对照为无核酸酶的DEPC水。