[发明专利]DMGDH基因多态性检测用试剂体系和试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种二甲基甘氨酸脱氢酶(DMGDH)基因多态性检测用试剂体系和试剂盒及其应用。

背景技术

微量元素硒能提高人体免疫机能，防癌抗癌，预防心脑血管疾病，保护肝脏，抗氧化、延缓衰老，参与糖尿病的治疗，保护、修复细胞，保护眼睛，提高红细胞的携氧能力，解毒、防毒、抗污染。硒缺乏主要表现为脱发、脱甲，部分患者出现皮肤症状，少数患者可出现神经症状及牙齿损害。人轻度或中度缺硒，其症状不明显。人体缺硒会导致的疾病有：能量缺乏性营养不良，血溶性贫血，克山病，高血压，缺血性心脏病，不妊娠，糖尿病等。

十二指肠是硒吸收的主要部位之一。硒由胃肠道吸收进入血液后，首先与球蛋白结合，也可结合于血浆高密度或低密度脂蛋白，进而由血浆运载进入各组织。肝、胰、肾、垂体及毛发内含硒较高，肌肉、骨胳、血液较低，脂肪组织最低。

硒能够增强人体的抗癌能力和提高自身免疫力。在满足营养需要的情况下，每天补充100微克硒，对免疫功能具有显著的刺激作用，淋巴细胞和中性细胞的生成量可大量增加。这两种细胞都具有破坏肿瘤细胞的作用。根据流行病学调查，补硒对减少前列腺癌、肺癌和肝癌的发生作用最为明显。硒还能防止人体免疫力低下。在每天服200微克硒制剂的人群中，癌症总死亡率降低了50％，总发病率降低了37％。其中，前列腺癌的发病率降低了63％；结肠癌的发病率降低了58％；肺癌的发病率降低了46％。

DMGDH是二甲基甘氨酸脱氢酶(dimethylglycine dehydrogenase)，可以控制肌氨酸在细胞中的水平，其缺陷或变异会导肌氨酸血症或肌氨酸尿症，且该基因在前列腺癌发生侵袭过程中扮演关键角色。rs921943是DMGDH基因上的一个单核苷酸多态性(SNP)位点，研究表明DMGDH基因的单核苷酸多态性与血硒浓度密切相关，其变异会使人血硒含量变化，影响人体新陈代谢。

目前检测单核苷酸多态性的常用方法有PCR-RFLP、基因芯片，sanger测序等方法。PCR-RFLP操作复杂耗时，并且结果可信度差。PCR-RFLP扩增条件要求严格，操作繁琐。基因芯片快速高效，但其造价高。Sanger测序费用较高，且杂合体不易分型。现有技术中，尚未有能够准确、方便且特异性检测基因多态性的方法。

发明内容

本发明解决的技术问题是：硒吸收情况难以预测，现有技术中检测基因单核苷酸多态性的方法灵敏度低、准确度低且操作不方便；尚未有能够准确、方便且特异性检测DMGDH基因单核苷酸多态性的试剂体系和试剂盒。

本发明的目的是提供一种DMGDH基因单核苷酸多态性检测用试剂体系和试剂盒，通过确定单核苷酸多态性来判断硒吸收情况；利用所述试剂盒检测DMGDH基因单核苷酸多态性的灵敏度高、准确度高、特异性强，操作简单，结果直观，实用性强。

具体来说，针对现有技术的不足，本发明提供了如下技术方案：

一方面，本发明提供了一种二甲基甘氨酸脱氢酶基因多态性检测用试剂体系，所述试剂体系包括特异性引物和限制性内切酶，所述特异性引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述限制性内切酶的酶切位点为SEQ ID NO.3所示序列的第301位与第302位之间。

优选的，所述限制性内切酶包括SspI酶。

优选的，所述试剂体系还包括缓冲液和dNTPs，所述缓冲液的组成包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钾和氯化镁。

优选的，所述试剂体系还包括DNA聚合酶，优选TaqDNA聚合酶。

另一方面，本发明还提供了一种二甲基甘氨酸脱氢酶基因多态性检测用试剂盒，所述试剂盒包含前述的试剂体系。

再一方面，本发明提供了特异性引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2以及酶切位点为SEQ ID NO.3所示序列的第301位与第302位之间的限制性内切酶在制备二甲基甘氨酸脱氢酶基因多态性检测用试剂体系或试剂盒中的应用。

优选的，所述二甲基甘氨酸脱氢酶基因多态性检测用试剂体系或试剂盒的使用方法包括以下步骤：

(1)获取样本DNA；

(2)利用特异性引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2对步骤(1)获取的样本DNA进行PCR扩增，得到扩增产物；

(3)利用酶切位点为SEQ ID NO.3所示序列的第301位与第302位之间的限制性内切酶与步骤(2)的扩增产物进行酶切反应；

(4)将步骤(3)的反应产物进行电泳。

优选的，在所述的应用中，所述限制性内切酶包括SspI酶。