[发明专利]使用同一脂肪细胞联合分析细胞增殖和沉脂能力的方法

说明书

使用同一脂肪细胞联合分析细胞增殖和沉脂能力的方法，包括培养的前脂肪细胞或脂肪细胞使用MTT工作液染色0.5‑2h；弃去MTT工作液后DMSO萃取，酶标仪490nm波长读取OD值；完全弃去DMSO萃取的液体，PBS清洗后加入4％多聚甲醛固定细胞0.5‑1h，PBS清洗后加入0.5％油红O染液染色0.5‑1h；弃去油红O染液，PBS清洗后加入异丙醇萃取，酶标仪510nm波长读取OD值。本发明解决了脂肪细胞体外研究中一直使用相同批次细胞分别检测脂肪细胞增殖和沉脂能力导致的数据不够精准的问题。既提高了数据的准确性，又节省了人力和实验费用。可应用于体外研究不同物种、不同组织部位来源的前体脂肪细胞分化、脂肪细胞沉脂能力及相关的分子调控机理，以及相关营养素或药物的筛选研发中应用。

技术领域

本发明涉及细胞学领域，具体涉及一种使用同一脂肪细胞联合分析细胞增殖和沉脂能力的方法。

背景技术

动物脂肪主要分布在内脏周围、皮下和肌肉等组织部位。对于人类而言，过多的脂肪沉积会引起一系列的疾病。对于畜禽而言，腹部脂肪蓄积过多会降低饲料的利用效率，也会额外增加加工费用，并造成一定的环境污染；而在一定范围内的肌内脂肪含量则会提高肉的品质。因此，脂肪代谢是相关领域的一个研究热点和难点。体外的细胞培养和研究，是生物科学领域的重要内容之一。尤其是在一些不容易获得组织材料或不方便直接开展活体实验的物种，体外细胞水平的研究更是在推进科学进展等方面起了不可或缺的重要作用。

一直以来，在前体脂肪细胞增殖和分化，以及脂肪细胞沉积脂肪等研究方向，为了测定细胞的脂肪沉积量，需要保证检测的细胞数量相同。以往的做法是直接在细胞铺板时调整细胞密度一致，由于技术的限制和培养过程中的其他因素影响，极易造成细胞数量不同。为了确保数据的准确性，研究者往往在现实操作中使用同批次的2板细胞分别测定细胞数目和脂肪含量两个指标，用以标定和比较单位细胞数目的细胞中的脂肪含量。但是，基于上述研究技术的局限，检测2板细胞的数目也无法保证完全相同。这样，造成了实验数据的不准确或实验误差大的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种使用同一脂肪细胞联合分析细胞增殖和沉脂能力的方法，该发明方法解决了脂肪细胞体外研究中一直使用相同批次细胞分别检测脂肪细胞增殖和沉脂能力导致的数据不够精准的问题。可应用于体外研究不同物种、不同组织部位来源的前体脂肪细胞分化、脂肪细胞沉脂能力及相关的分子调控机理，以及相关营养素或药物的筛选研发中应用。

为了解决上述问题，本发明提出以下技术方案：一种使用同一脂肪细胞联合分析细胞增殖和沉脂能力的方法，其特征在于，它采用同一脂肪细胞，先MTT法检测细胞增殖，然后用油红O染色检测细胞沉脂能力。

该方法的具体步骤如下：

(1)弃去6孔细胞培养板中前脂肪细胞或脂肪细胞的培养基，PBS漂洗3遍，加入体积比10％的MTT工作液2mL，于二氧化碳培养箱中孵育0.5-2h至细胞染色完全，完全弃去MTT工作液；

(2)加入0.5-1mL的DMSO于摇床轻微振荡混匀10min，显微镜下观察至细胞染色褪去，然后取96孔酶标板，每孔加入150μL混匀后的液体，酶标仪490nm波长读取OD值；

(3)完全弃去6孔细胞培养板中DMSO萃取的液体，PBS清洗细胞2-3次；1mL4％多聚甲醛固定细胞0.5h；PBS清洗细胞2-3次；加入0.5％油红O染液0.5-1mL，室温染色0.5-2h；

(4)弃去油红O染液，PBS清洗细胞3次，倒置显微镜拍照；加入1mL异丙醇，摇床轻微振荡混匀10min；取96孔酶标板，每孔加入150μL混匀后的液体，酶标仪510nm波长读取OD值。

优选的，步骤(1)中将MTT染色的细胞于二氧化碳培养箱中孵育时间为1h。

优选的，步骤(2)中加入的DMSO为1mL。