[发明专利]使用同一脂肪细胞联合分析细胞增殖和沉脂能力的方法

权利要求书

1.一种使用同一脂肪细胞联合分析细胞增殖和沉脂能力的方法，其特征在于，它采用同一脂肪细胞，先MTT法检测细胞增殖，然后用油红O染色检测细胞沉脂能力；具体步骤如下：

(1)弃去6孔细胞培养板中前脂肪细胞或脂肪细胞的培养基，PBS漂洗3遍，加入体积比10％的MTT工作液2mL，于二氧化碳培养箱中孵育0.5-2h至细胞染色完全，完全弃去MTT工作液；

(2)加入0.5-1mL的DMSO于摇床轻微振荡混匀10min，显微镜下观察至细胞染色褪去，然后取96孔酶标板，每孔加入150μL混匀后的液体，酶标仪490nm波长读取OD值；

(3)完全弃去6孔细胞培养板中DMSO萃取的液体，PBS清洗细胞2-3次；1mL 4％多聚甲醛固定细胞0.5h；PBS清洗细胞2-3次；加入0.5％油红O染液0.5-1mL，室温染色0.5-2h；

(4)弃去油红O染液，PBS清洗细胞3次，倒置显微镜拍照；加入1mL异丙醇，摇床轻微振荡混匀10min；取96孔酶标板，每孔加入150μL混匀后的液体，酶标仪510nm波长读取OD值。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中将MTT染色的细胞于二氧化碳培养箱中孵育时间为1h。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中加入的DMSO为1mL。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中加入DMSO完全萃取MTT染料，至细胞变为无色。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中加入的0.5％油红O染液为0.5mL。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)中加入0.5％油红O染液后室温染色时间为1h。

7.如权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，步骤(1)中检测的前脂肪细胞或脂肪细胞，可以是不同物种、不同组织来源、不同生长时期的前体脂肪细胞或脂肪细胞。

8.权利要求1-6任一所述的方法在针对体外研究不同物种、不同组织部位来源的前体脂肪细胞分化、脂肪细胞沉脂能力及相关的分子调控机理，以及相关营养素或药物的筛选研发中应用。