[发明专利]一组丙型流感病毒LAMP检测用引物及其应用

权利要求书

1.一组丙型流感病毒LAMP检测用引物，其特征在于，该组引物包括外引物对INF-CF3/INF-CB3、内引物对IFN-C FIP/ IFN-C BIP两对引物，引物序列如SEQ ID NO.1~4所示，具体如下：

INF-CF3：5’- CCAAATAATGGAAATGGTTGAAG-3’，

INF-CB3：5’- TCTTCTCCAAGGCCAGTA-3’；

IFN-C FIP：5’- TCTCAACCAAGCTGTGATTGTTC-TACGATCACCCAAACGACTA-3’，

IFN-C BIP：5’-GAGTAATGTCTCAGAAAGTGGAAGA-TCGTTCATTGCTGTGCTG-3’。

2.利用权利要求1所述丙型流感病毒LAMP检测用引物所制备的RT-LAMP检测用试剂盒，其特征在于，由如下组分构成：

（1）RNA提取液：TRIZol和RNA酶抑制剂，

（2）反应混合液：

由Bst DNA聚合酶缓冲液、Bst DNA聚合酶、AMV反转录酶、dNTP、Betaine、MgCl₂溶液、INF-CF3引物、INF-CB3引物、NF-C FIP引物、INF-C BIP引物、DEPC处理水构成；

（3）染色剂：染色剂HNB，

（4）阳性对照样品：重组质粒INF-CPMD；

（5）DEPC处理水。

3.如权利要求2所述RT-LAMP检测用试剂盒，其特征在于，25次检测用量各成分比例如下：

（1）RNA提取液：TRIZol，25mL，RNA酶抑制剂25μL；

（2）反应混合液：

10×的Bst DNA聚合酶缓冲液，62.5μL；

Bst DNA聚合酶，8U/μL、25μL；

AMV反转录酶，10U/μL、25μL；

dNTP，10mM、62.5μL；

Betaine，25mM、25μL；

MgCl₂溶液，150mM、25μL；

INF-CF3引物，5μm、25μL；

INF-CB3引物，5μm、25μL；

INF-C FIP引物，10μm、25μL；

INF-C BIP引物，10μm、25μL；

DEPC处理水，500μL；

（3）染色剂：染色剂HNB，5mM、25μL；

（4）阳性对照样品：重组质粒INF-CPMD，0.1ng/μL、20μL；

（5）DEPC处理水，1mL。

4.利用权利要求2或3所述RT-LAMP检测用试剂盒的丙型流感病毒的非疾病诊断目的的RT-LAMP检测方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

（1）获取待检测样品的RNA样本；

（2）RT-LAMP反应进行检测，

以相同操作方式以阳性对照样品替代待测样品的RNA样本进行RT-LAMP反应；

（3）结果判定：采用如下两种方式之一进行结果判定

A、凝胶电泳方式：对步骤（2）中RT-LAMP反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，电泳结束后，紫外灯下观察电泳条带，若出现阶梯状条带，则视为丙型流感病毒检测阳性，否则，视为阴性；

B、颜色观察方式：步骤（2）中RT-LAMP反应开始前，在反应体系中加入1μL的HNB染料，反应结束后，观察试管颜色，如果呈现蓝色表示样品阳性，感染有丙型流感病毒，如果呈现紫色，表示样品阴性，不含有丙型流感病毒。