[发明专利]阿卡波糖工程菌及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种阿卡波糖工程菌，所述阿卡波糖工程菌是产阿卡波糖的游动放线菌(Actinoplanes sp.)，其中以下一个或两个基因失活：

(i)编码序列如SEQ ID NO:2所示的多肽的基因M；

(ii)编码序列如SEQ ID NO:3所示的多肽的基因N。

2.根据权利要求1所述的阿卡波糖工程菌，其中，所述产阿卡波糖的游动放线菌是游动放线菌SN223/29。

3.根据权利要求1所述的阿卡波糖工程菌，其中，所述产阿卡波糖的游动放线菌是保藏号为CGMCC No.7639的游动放线菌8-22。

4.根据权利要求1所述的阿卡波糖工程菌，其中，所述基因M的序列如SEQ ID NO:4所示或为与SEQ ID NO:4所示序列有至少80％、90％、95％或99％序列同一性的序列，所述基因N的序列如SEQ ID NO:5所示或为与SEQ ID NO:5所示序列有至少80％、90％、95％或99％序列同一性的序列。

5.根据权利要求3或4所述的阿卡波糖工程菌，其中，所述阿卡波糖工程菌中，基因M或基因N失活为基因M或基因N缺失。

6.根据权利要求5所述的阿卡波糖工程菌，其中，所述基因M缺失中，缺失的片段为SEQID NO:4的第67-1297位核苷酸；所述基因N缺失中，缺失的片段为SEQ ID NO:5的第108-1098位核苷酸。

7.根据权利要求6所述的阿卡波糖工程菌，其中，所述阿卡波糖工程菌是游动放线菌△BY-3或△MG-4，其中，△BY-3是游动放线菌8-22与序列为SEQ ID NO:13的DNA片段发生同源重组而形成的，△MG-4是游动放线菌8-22与序列为SEQ ID NO:18的DNA片段发生同源重组而形成的。

8.一种阿卡波糖工程菌的制备方法，所述方法包括将产阿卡波糖的游动放线菌中的以下一个或两个基因失活：

(i)编码序列如SEQ ID NO:2所示的多肽的基因M；

(ii)编码序列如SEQ ID NO:3所示的多肽的基因N。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述产阿卡波糖的游动放线菌是游动放线菌SN223/29。

10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述产阿卡波糖的游动放线菌是保藏号为CGMCCNo.7639的游动放线菌8-22。

11.根据权利要求8所述的方法，其中，所述基因M的序列如SEQ ID NO:4所示或为与SEQID NO:4所示序列有至少80％、90％、95％或99％序列同一性的序列，所述基因N的序列如SEQ ID NO:5所示或为与SEQ ID NO:5所示序列有至少80％、90％、95％或99％序列同一性的序列。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中，将基因M或基因N失活的方法包括但不限于基因敲除、突变、插入失活、同源重组、RNA干扰。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述失活是使所述游动放线菌8-22与序列为SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:18的DNA片段发生同源重组。

14.如权利要求1-7任一项所述的阿卡波糖工程菌在制备阿卡波糖中的应用。

15.基因M或其编码的多肽或基因N或其编码的多肽在制备杂质A组分和/或B组分含量降低的阿卡波糖工程菌中的应用，其中，基因M编码序列如SEQ ID NO:2所示的多肽，基因N编码序列如SEQ ID NO:3所示的多肽。

16.根据权利要求15所述的应用，其中，所述基因M的序列如SEQ ID NO:4所示或为与SEQ ID NO:4所示序列有至少80％、90％、95％或99％序列同一性的序列，所述基因N的序列如SEQ ID NO:5所示或为与SEQ ID NO:5所示序列有至少80％、90％、95％或99％序列同一性的序列。