[发明专利]腺相关病毒AAV9及其在制备治疗戈谢氏病的制剂中的用途

说明书

本发明属于基因工程领域，涉及一种腺相关病毒AAV9及其在制备治疗戈谢氏病的制剂中的用途，本发明中，构建了pAAV‑CMV‑Gba‑MCS‑3flag重组质粒表达载体，其中整合入了Gba基因，包装了腺相关病毒AAV9，建立了成年小鼠全身性诱导型戈谢氏病模型，通过腺相关病毒AAV9对戈谢氏实验模型进行干预，能表达野生型β‑葡糖脑苷脂酶基因（GBA），补充患者有缺陷的GBA，本发明的干预治疗周期短，治疗效果明显，所需费用仅为酶替代疗法高昂的治疗费用的几百分之一，且本发明对I型、II型和III型戈谢氏病均适用。本发明相较于骨髓移植风险小、治疗所需腺相关病毒相较于骨髓供体更加易获得。本发明的重组质粒包装的腺相关病毒AAV9适用于制备治疗戈谢氏病的制剂。进一步为戈谢氏病提供一种新的干预治疗手段。

技术领域

本发明属基因工程领域，涉及腺相关病毒AAV9及其在制药中的用途，具体涉及一种腺相关病毒AAV9及其在制备治疗戈谢氏病的制剂中的用途，本发明中通过9型腺相关病毒AAV9干预，表达野生型β-葡糖脑苷脂酶基因（GBA），能补充患者有缺陷的GBA，进一步用于治疗戈谢氏病。

背景技术

现有技术公开了戈谢氏病（Gaucher's disease，GD）是一种常染色体隐性遗传性疾病，其病因为β-葡糖脑苷脂酶（β-glucocerebrosidase，GBA）基因突变导致所编码的GBA酶活性降低，致使葡糖脑苷脂不能被水解而聚积在网状内皮细胞的溶酶体中，形成典型的戈谢氏细胞。临床研究显示，患者表现出中枢神经系统（CNS）损伤、生长发育迟滞、肝脾肿大、骨损害、血细胞减少等一系列临床症状。GBA含497个氨基酸残基，其编码基因GBA位于人染色体1q21-22，长7.2 kb，由11个外显子和10个内含子构成。目前已发现GBA有300多种变异，包括点突变、缺失、插入、剪切位点突变、编码框移动性突变和重组等位基因等。戈谢氏病分为3种类型：GDI型(慢性型)、GDII型(急性神经型)和GDIII型(亚急性神经型)。GDI型在儿童与成人均可发病，起病缓慢，病程长，无神经系统受累症状。GDII型多在1岁以内发病，发病越早病情进展越快，往往在2岁前死亡，以神经系统症状为主。GDIII型起病较II型缓慢，有进行性痴呆、肌阵挛和核上性眼肌麻痹，伴有肝、脾肿大、骨损伤和再生障碍性贫血等。

目前，对戈谢氏病最有效的治疗方法是酶替换疗法（enzyme replacementtherapy, ERT）。临床实践显示，重组GBA（rGBA)治疗GDⅠ型效果明显，而对GDII型和Ⅲ型的脑损伤无效，究其原因是rGBA难以穿越血脑屏障，此疗法治疗费用昂贵，每年近200万元人民币，而且部分使用者产生IgG抗体（约15％）或过敏反应（3-4％），所述这些弊端使得ERT的应用受到了极大限制，虽然骨髓移植在一些无神经症状的戈谢氏病患者治疗中获得一些进展，但由于风险大，寻找合适供体困难，通常难以实施，且同样对于神经系统的症状无明显改善疗效。

早在20世纪70年代,吴旻院士就对遗传性疾病等的防治提出了基因治疗的设想，直到1990年，第一个基因治疗方案在美国被批准进入临床，自此以后基因治疗作为一种新兴的医疗手段日益引起人们重视，为人类疾病治疗开辟了一条新的途径，尤其是在一些目前传统医疗手段难以治疗的疾病方面显示出巨大的应用潜力，如糖尿病、心血管病、癌症和艾滋病等。基因治疗的载体在基因治疗过程中起着至关重要的作用，其中腺相关病毒（AAV）载体具有低致病性、对宿主免疫原性弱、长期稳定表达、广泛的细胞和组织亲嗜性等优点，是目前发展最热，也是最有希望的载体之一，已被广泛应用于临床研究。根据血清型的不同，目前常用的腺相关病毒可分为6型：AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV8, AAV9；不同血清型对不同器官的亲和力不同，如表1所示，

其中AAV9对皮质神经元的感染效果最好，并且可以穿越血脑屏障。Takashi Hirai等人曾利用AAV9表达shRNA用于治疗神经性疼痛。