[发明专利]胎盘细胞外基质的制备方法在审
申请号: | 201710126535.7 | 申请日: | 2017-03-06 |
公开(公告)号: | CN107007885A | 公开(公告)日: | 2017-08-04 |
发明(设计)人: | 王家伦;张芝加 | 申请(专利权)人: | 同坤源(天津)医药科技有限公司 |
主分类号: | A61L27/36 | 分类号: | A61L27/36 |
代理公司: | 北京世誉鑫诚专利代理事务所(普通合伙)11368 | 代理人: | 郭官厚 |
地址: | 300000 天津市西青*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 胎盘 细胞 基质 制备 方法 | ||
1.一种胎盘细胞外基质的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
Step1:将新鲜胎盘速冻并保存在-80℃环境中,冻存48h以上;
Step2:将冻存的胎盘取出,室温融化;
Step3:将融化的胎盘组织分离,并在研磨机上研磨成组织碎块,大小为0.1mm~2mm;
Step4:对研磨得到的组织碎块进行去细胞、病毒灭活和漂洗处理;
Step5:将处理后的组织碎块预先放置在-20℃~-80℃环境中过夜,或者迅速浸在干冰中,然后将组织碎块放置于冻干机内冻干24h~48h,即得胎盘细胞外基质。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,在Step4中,所述去细胞、病毒灭活和漂洗处理在室温下进行,具体的过程如下:
(1)将组织碎块浸于浓度为0.2%~2%的SDS溶液中,持续搅拌混匀30min~60min;
(2)将经上述处理后的组织碎块浸于浓度为0.3%~3%的Triton X-100溶液中,持续搅拌混匀1h~24h;
(3)将经上述处理后的组织碎块浸于浓度为1%-5%的NaCl溶液中,持续搅拌混匀30min~60min;
(4)将经上述处理后的组织碎块浸于浓度为0.2%-2%的过氧乙酸溶液中,持续搅拌混匀15min~30min;
(5)将经上述处理后的组织碎块浸于去离子水中,持续搅拌混匀30min~60min;
(6)重复步骤(1)至步骤(5),重复两次。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤(1)中,所述SDS溶液的浓度为1%。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤(2)中,所述Triton X-100溶液的浓度为2%。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,组织碎块浸于浓度为2%的Triton X-100溶液中后,持续搅拌混匀4h。
6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤(3)中,所述NaCl溶液的浓度为3%。
7.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤(4)中,所述过氧乙酸溶液的浓度为1%。
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