[发明专利]鉴定不同产地道地药材锁阳的方法及其试剂盒

说明书

本发明涉及一种鉴定不同产地道地药材锁阳的方法及其试剂盒，所述方法包括：1)以待测样品的基因组DNA为模板，扩增含有SEQ ID NO.1所示序列的片段；2)对扩增产物进行测序，拼接后去除引物区获得完整的扩增片段SEQ ID NO.1，检测SEQ ID NO.1序列中的5’端起第188位、第304或305位的碱基；如果SEQ ID NO.1序列5’端起第188位为T，或第304位为A，或第305位为C，则鉴定为塔城锁阳；如果SEQ ID NO.1序列5’端起第188位为C或第304位为T或第305位为T，则鉴定为其他产地锁阳。本发明方法适应性更广，引物特异性高，扩增效率高，能检测所有能提取出DNA的锁阳任何样品。

技术领域

本发明属于中药材来源品种鉴定技术领域，具体涉及用特异性的SNP标记对不同产地的道地药材锁阳的鉴定方法。

背景技术

锁阳为锁阳科植物锁阳(Cynomorium songaricum Rupr.)的干燥肉质茎，又名不老药，乌兰高腰，地毛球，羊锁不拉等。除去花序的肉质茎供药用。肉质茎富含鞣质，可提炼栲胶，并含淀粉，可酿酒，饲料及代食品。具有补肾、益精、润燥等功效，主治阳痿遗精、腰膝酸软、肠燥便秘、月经不调、不孕不育以及气弱阴虚等。我国锁阳主产于新疆、青海、甘肃、宁夏、内蒙古等省区。由于长期的生长环境及栽培方式的不同，锁阳形成了一定的种内变异，从而表现出品质上的差异。新疆塔城地区气候温和，雨量充沛，所产锁阳品质较好。不同产地的锁阳外观性状相似，传统的形态学鉴定很难将其区分开来，尤其对于药材粉末、饮片、中成药等鉴定有很大困难。利用SNP标记的鉴定方法能够解决道地锁阳的鉴别困难问题，这种基于DNA序列的鉴定方法具有准确、高效、重复性好等优点。

发明内容

本发明目的在于提供一种能够准确、快速鉴定不同产地锁阳的SNP标记及其引物对、试剂盒和检测方法，包括SNP检测法关键试剂、引物对、模板和检测步骤。

本发明提供的不同产地锁阳鉴定用SNP标记，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其中，SEQ ID No.1所示序列中只存在三个SNP：SEQ ID NO.1序列5’端起第188位塔城锁阳为T，其他产地锁阳(本文中指非塔城产地的锁阳，下同)为C；第304位塔城锁阳为A，其他产地锁阳为T；第305位塔城锁阳为C，其他产地锁阳为T。

本发明提供的SNP标记可用于鉴定不同产地锁阳。

如果SEQ ID NO.1序列5’端起第188位为T或第304位为A或第305位为C，则鉴定为塔城锁阳；

如果SEQ ID NO.1序列5’端起第188位为C或第304位为T或第305位为T，则鉴定为其他产地锁阳；

如果SEQ ID NO.1序列5’端起第188位不为T也不为C，且第304位为不为A也不为T，且第305位不为C也不为T，则鉴定样品不是锁阳。

本发明还提供一种不同产地锁阳鉴定方法，其包括如下步骤：

1)以待测样品的基因组DNA为模板，扩增含有SEQ ID NO.1所示序列的片段；

2)对扩增产物进行测序，拼接后去除引物区获得完整ITS片段，通过分析SEQ IDNO.1所示序列，确定SEQ ID NO.1序列中的5’端起第188位、第304或305位的碱基。

如果SEQ ID NO.1序列5’端起第188位为T，或第304位为A，或第305位为C，则鉴定为塔城锁阳；

如果SEQ ID NO.1序列5’端起第188位为C或第304位为T或第305位为T，则鉴定为其他产地锁阳；

如果SEQ ID NO.1序列5’端起第188位不为T也不为C，且第304位为不为A也不为T，且第305位不为C也不为T，则鉴定样品不是锁阳。