[发明专利]乳酸乳球菌食品级双筛选标记分泌表达载体、含有所述载体的工程菌株、其构建方法及应用

权利要求书

1.一种乳酸球菌食品级双筛选标记分泌表达载体，其特征在于所述载体包含P32启动子和乳酸球菌Usp45分泌蛋白的融合基因、melA基因和nisI基因双选择标记、质粒pWV01的复制子和多克隆位点；所述融合基因的核苷酸序列如SEQ No.2所示，所述载体的序列如SEQNo.1所示。

2.根据权利要求1所述的乳酸乳球菌食品级分泌表达载体在分泌表达外源蛋白中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述外源蛋白的编码基因是产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)的内切葡聚糖酶end-l的编码基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ No.5所示。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于所述在乳酸乳球菌中分泌表达产琥珀酸丝状杆菌内切葡聚糖酶end-l的载体是NN1-end-I，所述载体的核苷酸序列如SEQ No.6所示。

5.一株重组乳酸乳球菌，所述重组乳酸乳球菌是将权利要求1所述的乳酸球菌食品级双筛选标记分泌表达载体转化到宿主菌中得到的。

6.根据权利要求5所述的重组乳酸乳球菌，其特征在于所述宿主菌是乳酸乳球菌MG1363。