[发明专利]H10N7禽流感病毒的实时荧光PCR检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种H10N7禽流感病毒的实时荧光PCR检测试剂盒及检测方法。试剂盒分别设计了PCR引物和TaqMan荧光探针,引物包括引物1至4，它们分别具有序列表SEQ.ID.No.1和2、SEQ.ID.No.4和5的碱基序列；探针组包括探针A和探针B，它们分别具有序列表SEQ.ID.No.3和6的碱基序列。本发明的检测方法包括：标本处理，RNA核酸提取，RT‑PCR扩增反应及荧光信号检测，采用PCR及TaqMan荧光探针技术能对疑似人感染H10N7禽流感感染者标本H10N7的特异性核酸序列进行基因扩增并检测，从而判断H10N7的感染情况。本发明充分利用了PCR技术的高扩增性、良好的特异性和荧光检测技术的快速敏感性，反应结束时便可根据扩增曲线判定是否为H10N7禽流感病毒感染。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种H10N7禽流感病毒的实时荧光PCR检测试剂盒及检测方法。

背景技术

禽流感病毒(Avian Influenza Virus，AIV)属于正粘病毒科A型流感病毒属，为单股负链RNA，多形态的有囊膜病毒。禽流感病毒的基因组分为8个节段，分别编码HA、NA、NP、NS、MP、PA、PB1和PB2蛋白，病毒囊膜上的纤突，分别具有血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的活性。这两个基因是病毒的特异性抗原，根据HA和NA蛋白抗原性不同，目前可分为16个H亚型(H1-H16)和9个N亚型(N1-N9)。其病原体AIV为单股负链分节段的RNA病毒，其中血凝素(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)是两个比较重要的基因节段，Susan等{Baigent,Susan J.,and John W.McCauley.“Glycosylation of haemagglutininand stalk-length of neuraminidase combine to regulate the growth of avianinfluenza viruses in tissue culture.”Virus research 79.1(2001):177-185.}的研究表明HA和NA基因之间存在某种平衡对病毒的致病性有很大关系。

荧光定量PCR技术具有敏感、特异、准确可靠、能实现多重反应和实时性好等特点，多重荧光PCR采用多对引物扩增检测多个模板，克服了单重荧光PCR的不足。

当今呼吸道传染病在全球范围内广泛传播与流行，新的病种不断被发现，流行地域不断扩展，流行的频率不断增强，人感染H10N7禽流感病毒输入的危险性日益增高，对国境口岸的卫生安全造成了严重威胁，因此对呼吸道传染病的监测是国境口岸卫生检疫的重要工作。目前，针对H10N7亚型一步法实时荧光定量RT-PCR方法未见报道，因此，本领域技术人员有必要提供一种敏感性好、特异性高、准确可靠、快速方便的人感染H10N7禽流感病毒的实时荧光PCR检测试剂盒及检测方法。

发明内容

针对上述现有技术中的不足，本发明要解决的技术问题是提供一种敏感性好、特异性高、准确可靠、快速方便的H10N7禽流感病毒的实时荧光PCR检测试剂盒及检测方法。

为实现上述目的之一提供一种利用实时荧光PCR检测H10N7禽流感病毒的试剂盒，本发明采用了以下技术方案：

一种利用实时荧光PCR检测H10N7禽流感病毒的试剂盒，包括：

(1)RNA提取试剂、实时荧光定量PCR扩增反应试剂、阳性对照品、阴性对照品；

(2)引物组和探针组；引物组有引物1至4，分别具有序列表SEQ.ID.No.1和2、SEQ.ID.No.4和5的碱基序列；探针组有探针A和探针B，分别具有序列表SEQ.ID.No.3和SEQ.ID.No.6的碱基序列，所述引物和探针序列如下：

所述的特异性引物为：