[发明专利]一种人类肿瘤基因变异联合检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种人类肿瘤基因变异联合检测试剂盒，包括以下部分：EGFR基因引物组、KRAS基因引物组、BRAF基因引物组、NRAS基因引物组、PIK3CA基因引物组、HiFi酶、PCR反应液、消化酶、连接酶、连接缓冲液、连接接头、荧光探针、QPCR反应的Taq酶、QPCR引物和QPCR反应液。本发明提供的联合检测试剂盒能同时检测人类肿瘤的多种驱动基因的突变位点，包括EGFR、NRAS、KRAS、PIK3CA和BRAF中一个或多个基因突变位点，使实验结果灵敏度高，可以检测出1％的突变率，大大提高了检测灵敏度，克服了现有技术中的难题，同时整个实验过程满足大批量、快速检测的要求。

技术领域

本发明涉及基因变异检测领域，尤其涉及一种人类肿瘤基因变异联合检测试剂盒。

背景技术

肺癌是世界上常见的癌症，发病率和死亡率居各癌症之首。2002年全世界肺癌的新发病率为138万，近一半发生在发展中国家。据2008年我国卫生部的统计，肺癌死亡率为30.83/10万。肺癌已经成为发病率和死亡率第一位的恶性肿瘤，肺癌的死亡例数远大于乳腺癌和前列腺癌死亡例数的总和。

肺癌从组织病理学上可以分为两大类：小细胞肺癌和非小细胞肺癌，其中非小细胞肺癌约占所有肺癌病例数85％，包括鳞癌、腺癌和大细胞癌。发达国家的肺癌患者的5年生存率为15％～20％，而我国肺癌患者5年生存率仅为10％。其主要原因是大多数肺癌由于缺乏高灵敏度的基因突变检测和确诊技术，以及相匹配的科学治疗方案，从而失去了治疗的最佳时机。因此，肺癌的基因突变检测和诊断技术，对于与之匹配的科学有效的化疗方案，提高肺癌患者的生存率，延长生存期有着重大的现实意义。

肺癌的发生主要由于致癌环境下，驱动基因的突变，导致突变细胞过度增殖而形成。肺癌的驱动性基因突变是一种恶性的基因突变，是导致肺癌发生、增殖、转移和耐药的最根本原因。美国国立癌症研究所的肺癌突变联盟组织14家研究单位，对1000例的肺腺癌的驱动突变进行检测。结果显示约60％的患者含有驱动性基因突变。进一步表明了检测肺癌驱动性突变对于肺癌的早期诊断和化疗靶向用药的预后提供重要的中间信息。同时，肺癌的驱动性突变的检测是肺癌靶向药物的开发和用药的前提和基础。

目前常见的检测这些基因突变的方法主要有sanger测序法和荧光定量法。Sanger测序法中，单对引物可检测多个突变，但对多个基因、或同一基因的不同外显子的突变位点就需要分别进行扩增测序，操作繁琐，并且灵敏度较低约20％，假阳性率较高。荧光定量PCR法虽然灵敏度高，但对每对引物只能检测一种突变，且每种突变需要单独建立一个PCR体系，同时检测多个突变位点的操作繁琐。这两种方法对样本的需要量都较大，不适合同时检测多个基因突变位点。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种人类肿瘤基因变异联合检测试剂盒，可同时检测多个基因的不同的突变位点，同时具有检测灵敏度高，重复性好的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种人类肿瘤基因变异联合检测试剂盒，包括以下部分：EGFR基因引物组、KRAS基因引物组、BRAF基因引物组、NRAS基因引物组、PIK3CA基因引物组、HiFi酶、PCR反应液、消化酶、连接酶、连接缓冲液、连接接头、荧光探针、QPCR反应的Taq酶、QPCR引物和QPCR反应液；

所述EGFR基因引物组包括4对引物，所述EGFR基因引物的核酸序列如Seq ID No 1～Seq ID No 8所示；

所述BRAF基因引物组包括1对引物；所述BRAF基因引物的核酸序列如Seq ID No 9～Seq ID No 10所示；

所述基因NRAS引物组包括2对引物，所述NRAS基因引物的核酸序列如Seq ID No11～Seq ID No 14所示；