[发明专利]一种人类肿瘤基因变异联合检测试剂盒

权利要求书

1.一种人类肿瘤基因变异联合检测试剂盒，其特征在于，由以下部分组成：EGFR基因引物组、KRAS基因引物组、BRAF基因引物组、NRAS基因引物组、PIK3CA基因引物组、HiFi酶、PCR反应液、消化酶、连接酶、连接缓冲液、连接接头、荧光探针、QPCR反应的Taq酶、QPCR引物和QPCR反应液；

所述EGFR基因引物组包括4对引物，所述EGFR基因引物的核酸序列如Seq ID No 1～Seq ID No 8所示；

所述BRAF基因引物组包括1对引物；所述BRAF基因引物的核酸序列如Seq ID No 9～Seq ID No 10所示；

所述基因NRAS引物组包括2对引物，所述NRAS基因引物的核酸序列如Seq ID No 11～SeqID No 14所示；

所述基因KRAS引物组包括2条引物，所述KRAS基因引物的核酸序列如Seq ID No 15～Seq ID No 16所示；

所述PIK3CA基因引物组包括2对引物，所述PIK3CA基因引物的核酸序列如Seq IDNo 17～Seq IDNo 20所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，荧光探针的核苷酸序列如Seq ID No 21所示。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，QPCR引物的核苷酸序列如Seq ID No 22～Seq ID No 23所示。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，连接接头的核苷酸序列如Seq ID No 24～Seq ID No 33所示。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述消化酶为磷酸二酯酶；所述磷酸二酯酶的酶活力为5U/μL。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述连接酶为T4连接酶；所述T4连接酶的酶活力为1U/μL。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包含下列含量的组分：包含摩尔浓度为10mmol/L的dNTP混合物的5×扩增酶反应液；所述5×扩增酶反应液包含摩尔浓度为250mmol/L Tris-HCl、249mol/L KCl、8mmol/L Mg²⁺和质量浓度为50％的甘油。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述QPCR反应液包含下列含量的组分：包含摩尔浓度为10mmol/L的dNTP混合物的5×扩增酶反应液；所述5×扩增酶反应液包含摩尔浓度为250mmol/L Tris-HCl、249mol/L KCl、8mmol/L Mg²⁺和质量浓度为50％的甘油。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述HiFi酶的酶活力为5U/μL。

10.权利要求1～9任意一项所述的试剂盒在非诊断目的的检测基因EGFR、KRAS、BRAF、NRAS和PIK3CA中一个或多个基因突变中的应用。