[发明专利]一种染色质免疫共沉淀样品快速制备方法

权利要求书

1.一种染色质免疫共沉淀样品快速制备方法，包括：对细胞进行甲醛交联，固定蛋白与核酸的复合物，将蛋白核酸复合物抽提出来，再将染色质片段通过超声或酶解打断成小片段；将抗体挂到固相支持物磁珠上，再将获得的小片段加到制好的磁珠上孵育，获得磁珠抗原抗体复合物，孵育完成后将未结合物质洗去，其特征在于，对磁珠抗原抗体复合物进行重悬，获得待检测的磁珠抗原抗体复合物样品；所述磁珠的初始添加量≤10μl。

2.根据权利要求1所述的染色质免疫共沉淀样品快速制备方法，其特征在于，所述磁珠的初始添加量为10μl，所述抗体的初始添加量为1-10μl。

3.根据权利要求1所述的染色质免疫共沉淀样品快速制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1. 细胞裂解，获得蛋白核酸复合物的小片段；

S2. 准备磁珠，磁珠结合抗体：将磁珠完全重悬，制成磁珠重悬液，每个EP管中加入10μl磁珠重悬液，准备两份磁珠重悬液，一份结合抗体，一份去除非特异性蛋白；取1-10μl的抗体，加入到准备好磁珠重悬液的EP管中，4℃旋转、孵育1h；将磁珠抗体复合物从溶液中分离出来，吸去上清，清洗磁珠抗体复合物，制成磁珠抗体重悬液；

S3. 免疫共沉淀样品制备：将S1获得的蛋白核酸复合物的小片段中加入S2获得的磁珠重悬液中，4℃旋转1h，去除非特异性蛋白，收集上清；将上清加入所述磁珠抗体复合物的重悬液中，轻轻重悬，4℃旋转、孵育2h，使抗原与磁珠抗体复合物结合；用500μl的洗涤缓冲液清洗磁珠抗原抗体复合物两次，每次3min，清洗后分离，移去上清，再重悬；最后将磁珠抗原抗体复合物重悬于50μl dd H₂O中，取1-2μl用于后续检测。

4. 根据权利要求3所述的染色质免疫共沉淀样品快速制备方法，其特征在于，步骤S3中第一次清洗磁珠抗原抗体复合物的洗涤缓冲液包括：50 mM HEPES-KOH，pH 7.5；140 mMNaCl；1 mM EDTA；0.1% Triton X-100。

5. 根据权利要求3所述的染色质免疫共沉淀样品快速制备方法，其特征在于，步骤S3中第二次清洗磁珠抗原抗体复合物的洗涤缓冲液包括：39 mM NaH₂PO₄·H₂O；32.3 mMNa₂HPO₄·7 H₂O；154 mM NaCl，pH7.0。

6. 根据权利要求3所述的染色质免疫共沉淀样品快速制备方法，其特征在于，步骤S1包括：向细胞培养皿中加入甲醛进行交联，甲醛的终浓度为1%，37℃孵育10min，终止交联，用4℃的PBS洗细胞2~3次，最后一次吸干PBS；加入500μl预冷的含蛋白酶抑制剂的细胞裂解缓冲液，冰上裂解30min；用预冷的细胞刮将细胞从培养瓶上刮下，将裂解液收集到1.5mlEP管中，超声破碎，获得蛋白核酸复合物的小片段。