[发明专利]基于RPA技术检测菜豆荚斑驳病毒的方法、RPA引物及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及检测菜豆荚斑驳病毒的RPA方法、引物及试剂盒。

背景技术

菜豆荚斑驳病毒是危害大豆等豆科植物的重要病毒，在我国目前并无此病毒的分布，其主要发生于美国、加拿大、巴西、秘鲁、厄瓜多尔等大豆产区，自然寄主有大豆、豇豆、菜豆，实验寄主有20属25种植物，可以通过汁液接种传播、甲虫传播和种子远距离传播。

根据病毒侵染时间的不同，该病毒能够造成3％至52％的产量损失并降低大豆品质，如与大豆花叶病毒混合侵染，可造成高达85％的大豆产量损失，一旦传入我国并定殖下来，将很难根除，会对我国农业生产造成重大损失。因此，该病毒已被列入我国新修订的植物检疫性有害生物名单中，由于目前尚无有效的病毒防治方法，因此加强出入境检验检疫工作是防止这种病毒传入的最有效的途径之一。

我国每年从国外进口大量的大豆，为防止该危险性病毒的传入，必须加强开发该病毒的快速检测技术。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种灵敏、准确、简便和快速的基于RPA技术的检测菜豆荚斑驳病毒的方法，本发明还提供了用于该方法的特异性好、灵敏度高、检测时间短、不需要特殊的仪器和适用范围广的RPA引物和含有该RPA引物的试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

本发明第一方面提供了一种引物对，其中一条引物包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，另一条引物包含SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

本发明第二方面提供了所述的引物对在检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒，或制备检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒的产品中的应用；

在一优选例中，所述检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒包括：检测或辅助检测待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒，以及检测或辅助检测待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒；

在一优选例中，所述制备检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒的产品包括：制备检测或辅助检测待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒的产品，以及制备检测或辅助检测待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒的产品。

本发明第三方面提供了一种试剂盒，包括所述的引物对。

在一优选例中，还包括RPA恒温扩增试剂；

在一优选例中，所述RPA恒温扩增试剂包括来自TwistDX公司的RPA扩增试剂盒TwistAmp Basic kits所包含的试剂。

在一优选例中，还包括植物总RNA提取试剂。

在一优选例中，所述植物总RNA提取试剂包括来自天根生物科技有限公司货号为DP432的植物总RNA提取试剂盒所包含的试剂。

在一优选例中，还包括反转录试剂。

在一优选例中，所述反转录试剂包括来自TaKaRa的货号为RR014A的PrimeScript RT-PCR Kit所包含的试剂。

本发明第四方面提供了一种试剂盒在检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒，或制备检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒的产品中的应用；

在一优选例中，所述检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒包括：检测或辅助检测待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒，以及检测或辅助检测待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒；

在一优选例中，所述制备检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒的产品包括：制备检测或辅助检测待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒的产品，以及制备检测或辅助检测待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒的产品。

本发明第五方面提供了一种检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒的方法，包括使用所述的引物对或所述试剂盒的步骤。

在一优选例中，所述检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒包括：检测或辅助检测待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒；以及检测或辅助检测待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒。

在一优选例中，所述的方法包括如下步骤：

1)RPA扩增

从待测植物样品或待测病毒中提取总RNA，然后将其反转录成cDNA，再以cDNA为模板与所述的引物对或所述试剂盒进行RPA扩增。

2)根据RPA扩增的结果判断待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒，或待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒；

在一优选例中，所述RPA扩增的结果判断的标准为：

若所述RPA扩增得到的RPA扩增产物含有大小为198bp的片段，则所述待测植物样品感染菜豆荚斑驳病毒，或待测病毒为或候选为菜豆荚斑驳病毒；