[发明专利]基于RPA技术检测菜豆荚斑驳病毒的方法、RPA引物及试剂盒

权利要求书

1.引物对，其中一条引物包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，另一条引物包含SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

2.权利要求1所述的引物对在检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒，或制备检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒的产品中的应用；

任选的，所述检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒包括：检测或辅助检测待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒，以及检测或辅助检测待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒；

任选的，所述制备检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒的产品包括：制备检测或辅助检测待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒的产品，以及制备检测或辅助检测待测病毒为或候选为菜豆荚斑驳病毒的产品。

3.一种试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的引物对。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：还包括RPA恒温扩增试剂；

任选的，所述RPA恒温扩增试剂包括来自TwistDX公司的RPA扩增试剂盒TwistAmp Basic kits所包含的试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：还包括植物总RNA提取试剂；

任选的，所述植物总RNA提取试剂包括来自天根生物科技有限公司货号为DP432的植物总RNA提取试剂盒所包含的试剂；

任选的，还包括反转录试剂；

任选的，所述反转录试剂包括来自TaKaRa的货号为RR014A的PrimeScript RT-PCR Kit所包含的试剂。

6.权利要求3至5任一项所述的试剂盒在检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒，或制备检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒的产品中的应用；

任选的，所述检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒包括：检测或辅助检测待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒，以及检测或辅助检测待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒；

任选的，所述制备检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒的产品包括：制备检测或辅助检测待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒的产品，以及制备检测或辅助检测待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒的产品。

7.一种检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒的方法，其特征在于：包括使用权利要求1所述的引物对或权利要求3-5中任一项所述试剂盒的步骤。

任选的，所述检测或辅助检测菜豆荚斑驳病毒包括：检测或辅助检测待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒；以及检测或辅助检测待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)RPA扩增

从待测植物样品或待测病毒中提取总RNA，然后将其反转录成cDNA，再以cDNA为模板与权利要求1所述的引物对或权利要求3-4中任一项所述试剂盒进行RPA扩增；

2)根据RPA扩增的结果判断待测植物样品是否感染菜豆荚斑驳病毒，或待测病毒是否为或候选为菜豆荚斑驳病毒；

任选的，所述RPA扩增的结果判断的标准为：

若所述RPA扩增得到的RPA扩增产物含有大小为198bp的片段，则所述待测植物样品感染菜豆荚斑驳病毒，或待测病毒为或候选为菜豆荚斑驳病毒；若所述RPA扩增产物不含有大小为198bp的片段，则所述待测植物样品未感染菜豆荚斑驳病毒，或待测病毒不为或候选不为菜豆荚斑驳病毒。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

步骤1)中从待测植物样品中提取总RNA是采用天根生物科技有限公司货号为DP432的植物总RNA提取试剂盒进行的；

步骤1)中将总RNA反转录成cDNA是采用TaKaRa的货号为RR014A的PrimeScript RT-PCR Kit进行的。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述RPA扩增的反应体系如下：

含有冻干酶粉的0.2mL TwistAmp反应管

再水化缓冲液29.5μL

SEQ ID NO：1所示的引物和SEQ ID NO：2所示的引物各2μL，引物的终浓度均为0.4μmol/L

cDNA50ng

醋酸镁溶液2.5μL，浓度为280mmol/L

去离子水12.5μL

任选的，所述RPA扩增的反应条件如下：所述RPA扩增的温度为37℃，时间为40min。