[发明专利]一种快速检测牛奶中支原体的方法

权利要求书

1.一种快速检测牛奶中支原体的方法，其特征在于，步骤如下：(1)从奶牛场采集牛奶样，摇匀，取0.2ml放到1.5ml离心管中；(2)向奶样中加入0.8ml DNA提取裂解液，充分混合，静置5min，期间每间隔2min充分摇动一次；(3)继续向奶样中加入0.2ml脂肪分离液，充分摇匀，静置2min；(4)静置结束后，在10000r/min的转速下离心2min；(5)离心结束后，将上清液移到离心柱中，盖上盖，10000r/min离心2min后，弃去回收管及里面液体，将离心柱放于1.5ml的离心管中，向离心柱中加100uL蒸馏水，10000r/min离心1min；(6)在反应管中加入12.5uL支原体检测反应液，然后加入2uL步骤(5)处理后的奶样，最后加入10.5uL蒸馏水，充分混合；(7)将反应管放于63℃水浴锅中保温50min；(8)保温结束后，加入2uL支原体检测显色液，肉眼观察或借助紫外灯观察颜色变化，用肉眼观察时，溶液为黄色说明牛奶中存在支原体，橙色说明没有支原体；用紫外灯观察时，溶液为亮黄色说明牛奶中存在支原体，暗棕色说明没有支原体。

2.如权利要求1所述的快速检测牛奶中支原体的方法，其特征在于，步骤(2)所述DNA提取裂解液的配制方法为：将57.3g盐酸胍和50ml水饱和酚混合，加蒸馏水配成总体积为100ml，混合均匀。

3.如权利要求1所述的快速检测牛奶中支原体的方法，其特征在于，步骤(3)所述脂肪分离液是氯仿。

4.如权利要求1所述的快速检测牛奶中支原体的方法，其特征在于，步骤(6)所述支原体检测反应液由以下物质组成：

其中，MgSO₄溶液中含有MgSO₄ 100mM，dNTP溶液中含dNTP10mM。

5.如权利要求1所述的快速检测牛奶中支原体的方法，其特征在于，步骤(8)所述支原体检测显色液为SYBR Green。