[发明专利]一种捕获核酸结合蛋白的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种捕获RBP和/或RNA的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

1）将带有亲偶极基团的核苷类似物加入到可合成RNA的生物样品体系中；所述带有亲偶极基团的核苷类似物包括EU、EC、EG、EA或其组合；

2）光激活处理，使RNA与蛋白发生光交联；

3）加入含有1，3- 二偶极基团的第一标记分子的点击反应液，通过点击反应将第一标记分子与掺有核苷类似物的RNA共价连接，使RNA被第一标记分子标记，所述点击反应为亚铜离子催化下的Huisgen三唑反应，所述点击反应液中包括有催化剂和蛋白保护剂，所述蛋白保护剂为氨基胍和THPTA；所述1，3- 二偶极基团为叠氮基；

4）加入细胞裂解液，至样品溶液澄清，所述细胞裂解液中包括有0.15M-1M的Li盐和0.1-1%的含锂离子的去垢剂；

5）加入连接有载体的第二标记分子，第二标记分子能与第一标记分子结合反应，通过第二标记分子与第一标记分子的结合反应，将所形成的RNA-蛋白复合物偶联至带有第二标记分子的载体上；

6）分离获得载体上的RNA-蛋白复合物；

7）分离获得RNA-蛋白复合物中的RBP和/或RNA。

2.根据权利要求1所述的捕获RBP和/或RNA的方法，其特征在于，所述蛋白保护剂为0.3-1.5mM的THPTA和0.5-1.5mM的氨基胍。

3.根据权利要求2所述的捕获RBP和/或RNA的方法，其特征在于，所述蛋白保护剂为0.6mM的THPTA和1mM的氨基胍。

4.根据权利要求1-3任一项所述的捕获RBP和/或RNA的方法，其特征在于，所述细胞裂解液包括有0.45M-0.5M的LiCl和0.5-1%的LiDS。

5.根据权利要求1-3任一项所述的捕获RBP和/或RNA的方法，其特征在于，所述催化剂为一价Cu⁺或Vitamin C和Cu²⁺的组合。

6.根据权利要求1-3任一项所述的捕获RBP和/或RNA的方法，其特征在于，所述步骤2）的光为UV254、UV365或其组合。

7.根据权利要求1-3任一项所述的捕获RBP和/或RNA的方法，其特征在于，所述第一标记分子包括生物素、地高辛、金颗粒、纳米颗粒或抗体；所述第二标记分子包括识别第一标记分子生物素的链霉亲和素；所述载体包括磁珠或琼脂糖珠。