[发明专利]一种稳定的5’-核糖核苷酸水解酶检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种稳定的5'‑核糖核苷酸水解酶(过氧化物酶法)检测试剂盒，属于临床体外诊断检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1和试剂R2。通过选择100 mmol/L pH为7.6的HEPES缓冲液，同时在试剂R2中选择稳定性好的肌苷酸二钠作为底物，且添加适量的D‑海藻糖、甘露醇、Triton X100和叠氮钠，提高了试剂盒的热稳定性，试剂的准确度和抗干扰性也较好。因此，本发明提供的5'‑核糖核苷酸水解酶(过氧化物酶法)检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。

技术领域

本发明涉及临床体外诊断检测试剂技术领域，特别涉及一种5'-核糖核苷酸水解酶检测试剂盒（过氧化物酶法）。

背景技术

5'-核糖核苷酸水解酶（5'-Nucleoticlase, 5'-NT）简称5'-核苷酸酶。5'-NT是一种对底物特异性不高的可作用于多种核苷酸的水解酶，能将次黄嘌呤核苷酸水解为次黄苷和磷酸。5'-NT广泛分布在人体和动物的组织中，例如肝、胆、胰、肠、心、脑、肺、肾、等脏器和组织中均有分布。5'-NT定位在细胞膜上，在肝内主要存在于胆小管和窦状间隙内。5'-NT在人体的运动、细胞生长发育、纤维蛋白合成、提高表皮或内皮屏障功能、神经传递及淋巴细胞的再循环及黏附、免疫应答等方面均发挥重要的作用。

本发明的试剂盒用于检测人体血清或血浆中5'-核糖核苷酸水解酶 （5'-NT）的活性，具有重要的临床意义。5'-NT活性增高常见于原发性和转移性肝癌、胆道癌、胰腺癌、胆道阻塞、胆管炎、急、慢性肝炎、肝硬化、药物性肝损伤，其活性增高可达2～6倍，且与病情严重程度呈正相关。5'-NT是诊断肝肿瘤非常灵敏的酶学指标。在病变早期，当肝功能、肝扫描和有关肝病检查阴性时本酶活性已明显增高。5'-NT经肝细胞膜进入胆汁，随之进入血清中，是检测肝胆疾病的指标之一。肝内外胆管堵塞和伴随循环转移的乳房切除术后的病人此酶升高明显。对于AFP阴性病例，其与AFP互补诊断肝癌的阳性率可达94％。ALP在肝胆系统疾病和骨骼系统疾病时均可增高。5'-NT除肝胆系统疾病增高外，骨骼系统疾病一般均不升高。因此5'-NT的检测能协助判断病人碱性磷酸酶（ALP）增高是由于肝胆系统疾病，还是骨髓系统疾病（如骨癌、骨肉瘤、佝偻病等）。5'-NT的检测也有助于鉴别诊断肝细胞性黄疸和阻塞性黄疸。

5'-核糖核苷酸水解酶（5'-NT）的检测方法主要有化学发光法、钼蓝比色法、过氧化物酶法等。本发明属于过氧化物酶法，优化反应体系，选用pH 7.6的HEPES缓冲液，选择稳定性更好的肌苷酸二钠为底物，并使用适量的D-海藻糖、甘露醇、Triton X100和叠氮钠为稳定剂，显著改善了检测试剂的热稳定性，发明了一种更稳定的5'-核糖核苷酸水解酶（过氧化物酶法）检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定的用于检测血清或血浆中5'-核糖核苷酸水解酶（5'-NT）的试剂盒，该试剂盒采用过氧化物酶法。该试剂盒与常规的试剂盒相比，热稳定性和抗干扰性比常规的检测试剂盒要好，有利于保证试剂在夏季高温时节的长途运输中品质稳定，有利于在临床上的推广应用。

基本原理：

次黄嘌呤核苷酸(又名肌苷酸)在5'-核糖核苷酸水解酶（5'-NT）的催化下生成次黄苷和磷酸，次黄苷和磷酸在核苷酸磷酸化酶（PNP）作用下生成次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化镁作用下氧化生成尿酸和过氧化氢，过氧化氢和TBHBA、4-AA在过氧化氢酶作用下生成红色醌类物质（Trinder's 反应）。

本发明是通过以下步骤得到的：

试剂R1组成为：

HEPES缓冲液，pH 7.6 100mmol/L

β-甘油磷酸钠 85mmol/L

氯化镁 53.4mmol/L