[发明专利]一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法及其应用

说明书

基于现有小肠结肠炎耶尔森氏菌检测方法的不足，本发明旨在提供一种用于小肠结肠炎耶尔森氏菌检测的试剂盒，其包括：探针分子溶液、聚苯乙烯纳米球溶液、阳性对照质粒、阴性对照，其中所述探针分子的结构为：报告荧光基团‑CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA。该方法实现起来十分简单，不需要使用昂贵的PCR仪器以及昂贵的ELISA检测试剂，仅需简单的荧光检测设备即可实现结果的检测和分析，检测时间短、灵敏度高，可以广泛用于食品安全检测，特别是基层食品卫生监督部门的食品安全检测。

技术领域：

本发明属于生物技术领域，涉及病原菌--小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测，具体涉及一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法及其应用。

背景技术：

小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica, Y. e)，简称耶氏菌，属于肠杆菌科耶尔森氏菌属，最早1933年发现于美国纽约州，由Frederiksen在1964年命名的，小肠结肠炎耶尔森氏菌在自然界分布很广，动物是该菌的重要宿主，几乎所有的家畜都曾发现该菌的自然感染，其中猪携带量最高，其次为犬、鸡、牛和羊等。小肠结肠炎耶尔森氏菌是一类人畜共患病病原菌，也是重要的食源性致病菌之一， 很多国家都已将该菌列为进出口食品的常规检测项目，在过去的二十年间， 欧、美等国家发生了多起的由该菌引起的食源性中毒事件; 在上世纪80年代中期我国证实有两次大的暴发流行, 造成五百多人感染,其原因均为食物污染小肠结肠炎耶尔森氏菌引起的。该菌具有嗜冷性，能在冷藏条件下生长与繁殖，而且在一定条件下会产生耐热性肠毒素，是冷藏食品的一大威胁，尤其是贮藏于冰箱中的肉制品、奶制品。人感染后，其临床表现多样，其中以胃肠炎(或小肠结肠炎)最为常见，还能引起呼吸道、心脑血管系统、骨骼、结缔组织和全身疾病， 甚至引起急性阑尾炎、败血症。许多动物都有可能受到小肠结肠炎耶尔森氏菌的感染，几乎所有家养动物都属于自然感染，其中一部分动物，如猪、牛、猫和狗等，被认为是小肠菌的健康带菌者。小肠结肠炎耶尔森氏菌典型的宿主动物是猪（带菌率最高），有50%的被侵染率。牛的被侵染率也很大，约为7.9%~24.6%。啮齿类动物的携菌几率大概在5.2%~10%之间，目前已检测出的本身携带小肠结肠炎耶尔森氏菌的啮齿动物有30多种。

小肠结肠炎耶尔森氏菌是重要的人畜共患病微生物，能通过食物传播。该菌能够引起多种动物以及人的小肠结肠炎耶尔森氏菌病。正因如此很多国家规定，对于进出口的食品该菌是必检的常规项目。常规的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法操作步骤复杂，并且费时，一般要 3~7 天，例如2008年颁布的新国标GB/T4789.8-2008是目前主流的检测手段，不能达到快速检测食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的要求。所以建立一种快速、有效的检测食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法是迫切需要的。

发明内容：

基于现有小肠结肠炎耶尔森氏菌检测方法的不足，本发明旨在提供一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法及其运用，该小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法操作简单，灵敏度高，特异性高，特别适合基层食品安全的检测。

为实现本发明的目的，解决现有技术中存在的技术问题，本发明采用了如下技术方案：

一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法，包括如下步骤：

步骤一，制备探针分子：根据小肠结肠炎耶尔森氏菌的基因组结构和保守序列，选取小肠结肠炎耶尔森氏菌的毒力基因ail作为检测目标片段，根据GenBank: KT209996.1公开的小肠结肠炎耶尔森氏菌ail基因序列，设计探针分子，所述探针分子序列为5’-CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA-3’，所述探针分子的5’端采用报告荧光基团进行标记，即探针分子结构为：报告荧光基团- CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA；

步骤二，将聚苯乙烯纳米球溶液与步骤一所制得的探针分子：报告荧光基团-CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA混合，然后加入待测样品，检测荧光。