[发明专利]一种小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法，包括如下步骤：

步骤一，制备探针分子：根据小肠结肠炎耶尔森氏菌的基因组结构和保守序列，选取小肠结肠炎耶尔森氏菌的毒力基因ail作为检测目标片段，根据GenBank: KT209996.1公开的小肠结肠炎耶尔森氏菌ail基因序列，设计探针分子，所述探针分子序列为5’-CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA-3’，所述探针分子的5’端采用报告荧光基团进行标记，即探针分子结构为：报告荧光基团- CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA；

步骤二，将聚苯乙烯纳米球溶液与步骤一所制得的探针分子：报告荧光基团-CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA混合，然后加入待测样品，检测荧光；

所述的食品为肉类食品。

2.根据权利要求1所述的食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法，其特征在于，步骤一中所述的报告荧光基团选自异硫氰酸荧光素FITC、羟基荧光素FAM、四氯荧光素TET、四甲基罗丹明TAMRA、ROX、CY3、CY5、CY5.5、CAL red、Red640和Texas Red。

3.根据权利要求1或2所述的食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法，其特征在于，步骤二中所述的聚苯乙烯纳米球由以下方法制备得到：将0.05g过硫酸氨和0.05g十二烷基磺酸钠溶解到10mL水中，再加入12mL苯乙烯，将反应物加热一段时间，然后将产物离心，用甲醇冲洗移除SDS，即制得聚苯乙烯纳米球。

4.一种用于小肠结肠炎耶尔森氏菌检测的试剂盒，所述试剂盒由探针分子溶液、聚苯乙烯纳米球溶液、阳性对照质粒和阴性对照组成，其中所述探针分子的结构为：报告荧光基团- CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA；

所述用于小肠结肠炎耶尔森氏菌检测的试剂盒检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法包括如下步骤：

步骤一，制备探针分子：根据小肠结肠炎耶尔森氏菌的基因组结构和保守序列，选取小肠结肠炎耶尔森氏菌的毒力基因ail作为检测目标片段，根据GenBank: KT209996.1公开的小肠结肠炎耶尔森氏菌ail基因序列，设计探针分子，所述探针分子序列为5’-CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA-3’，所述探针分子的5’端采用报告荧光基团进行标记，即探针分子结构为：报告荧光基团- CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA；

步骤二，将聚苯乙烯纳米球溶液与步骤一所制得的探针分子：报告荧光基团-CATGGAAAGGTTAAGTCATCTGTA混合，然后加入待测样品，检测荧光；

所述的食品为肉类食品。

5.权利要求1或2或3所述的食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法或权利要求4所述的用于小肠结肠炎耶尔森氏菌检测的试剂盒在用于食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌检测中的应用，所述的食品为肉类食品。

6.根据权利要求5所述的应用，所述肉类食品是畜禽肉和鱼肉。

7.根据权利要求6所述的应用，所述肉类食品是冻藏的肉类食品。