[发明专利]一种利用血糖仪高灵敏定量检测黄曲霉毒素B1的方法

说明书

本发明属于黄曲霉毒素B1的定量检测领域，公开了一种利用血糖仪定量检测黄曲霉毒素B1的方法，利用纳米金标记黄曲霉毒素的核酸适配体，通过黄曲霉毒素B1单克隆抗体、核酸适配体与目标物黄曲霉毒素B1结合，形成具有夹心式结构的单克隆抗体‑黄曲霉毒素B1‑检测探针复合物，具有更强的特异性，与待测物中的目标分子结合效果好，检测结果更加精确、定量检测范围更广，具有体积小、成本低、操作简单的特点。

技术领域

本发明属于黄曲霉毒素B1的定量检测领域，具体涉及一种利用血糖仪高灵敏定量检测黄曲霉毒素B1的方法。

背景技术

黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物。目前已鉴定分离出AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1、AFM2、AFP1、AFQ1和AFH1等十多种黄曲霉毒素，其中黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，简称AFB1)的毒性和致癌性最强。AFB1的强毒性、高致癌性以及存在的广泛性，对人类健康安全和畜牧业等造成了严重的威胁，因此开发黄曲霉毒素B1的高灵敏检测方法是国内外关注的热点。

核酸适配体是一段寡聚核苷酸，功能与抗体相似，能够特异性结合靶目标分子，凭借其与抗体相比的众多优点吸引了研究人员的广泛关注，如低成本、高稳定性、易修饰、易合成、不需要活体动物或细胞、可重复利用等。

家用便携式血糖仪能够对血糖进行准确的测量，并且具有体积小、成本低和操作简单的特点，成为预防糖尿病的有用工具，是很多家庭的医疗必备品。但它们只能对单一目标物血糖(葡萄糖)进行检测，难以应用于不同类型目标物的检测，这大大限制了这些便携式仪器即时检测的应用范围。怎样利用血糖仪检测非糖靶目标，吸引了研究人员的关注。

目前可分离定量检测AFB1的方法主要有薄层色谱法，高效液相色谱法，液相色谱-串联质谱法以及免疫分析方法。这些方法大多需要体积庞大、价格昂贵的检测设备，并且操作步骤繁琐，检测周期长，不利于现场即时检测。因此，开发一种基于血糖仪检测黄曲霉素B1的方法，实现对黄曲霉素B1这一非糖靶目标的快速简单、高灵敏度检测，具有广泛的应用前景。

发明内容

本发明目的是提供一种利用血糖仪高灵敏定量检测黄曲霉毒素B1的方法，通过抗体、核酸适配体同时与目标物结合，具有更强的特异性，与待测物中的目标分子结合效果好，检测结果更加精确、定量检测范围广，具有体积小、成本低、操作简单的特点。

为实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种利用血糖仪高灵敏定量检测黄曲霉毒素B1的方法，包括以下步骤：

步骤一：制备纳米金-蔗糖酶-核酸适配体检测探针复合物；

步骤二：将黄曲霉毒素B1的单克隆抗体，4℃孵育12h；用缓冲液B冲洗；然后加入封闭缓冲液，室温封闭1h；用缓冲液A冲洗，完成黄曲霉毒素B1的单克隆抗体的固定；

步骤三：向步骤二的黄曲霉毒素B1的单克隆抗体中加入不同浓度的黄曲霉毒素B1待测液，37℃孵育1h，使黄曲霉毒素B1与黄曲霉毒素B1的单克隆抗体进行特异性结合，用缓冲液A冲洗未与单克隆抗体结合的黄曲霉毒素B1，得到黄曲霉毒素B1与单克隆抗体的结合体；

步骤四：在步骤三所得的结合体中加入步骤一制备的纳米金-蔗糖酶-核酸适配体检测探针复合物，37℃孵育2h，形成具有夹心式结构的单克隆抗体-黄曲霉毒素B1-检测探针复合物，未与结合体上的黄曲霉毒素B1结合的纳米金-蔗糖酶-核酸适配体检测探针复合物留在上层上清液中；

步骤五：取步骤四的上清液，加入蔗糖溶液，37℃孵育30min后，用血糖仪进行定量检测。

进一步地，所述制备纳米金-蔗糖酶-核酸适配体检测探针复合物的步骤如下：

a)将蔗糖酶加入到胶体金中混合，4℃孵育6h，得到纳米金-蔗糖酶复合物；