[发明专利]一种利用基因敲除技术构建细菌缺陷株的试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201710029839.1 | 申请日： | 2017-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN106591346A | 公开（公告）日： | 2017-04-26 |
| 发明（设计）人： | 卿志荣;郭帅;修朝阳;郑帮 | 申请（专利权）人： | 江苏睿玻生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 226000 江苏省南通市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 基因 技术 构建 细菌 缺陷 试剂盒 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用基因敲除技术构建细菌缺陷株的试剂盒及方法，其特征在于，所述试剂盒包括：用于快速敲除目的基因组DNA的载体pCAG-NHEJ，用于载体构建的DH5α感受态细胞。
2.一种利用基因敲除技术构建细菌缺陷株的试剂盒及方法，包括试剂A和试剂B,其特征在于：所述的试剂A含有pCAG-NHEJ载体,所述的试剂B含有用于载体构建的DH5α感受态细胞。
3.如权利要求2所述的一种利用基因敲除技术构建细菌缺陷株的试剂盒及方法，其特征在于，所述的pCAG-NHEJ为本发明所改造的载体，其序列为SEQ ID NO:1。
4.如权利要求2所述的一种利用基因敲除技术构建细菌缺陷株的试剂盒及方法，其特征在于，所述的pCAG-NHEJ载体双酶切位点优选的为SpeI及BamHI内切酶。
5.一种利用基因敲除技术构建细菌缺陷株的试剂盒及方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
(1)细菌转化所用质粒的构建，所述的细菌转化所用质粒的构建包括pCAG-NHEJ质粒的构建；
(2)细菌转化，细菌转化所用的细菌优选的为E.coli；
(3)抗性筛选；
(4)验证sgRNA对目的基因DNA敲除作用的有效性。
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