[发明专利]一种用于检测乳腺癌的引物组及检测方法在审
申请号: | 201710013384.4 | 申请日: | 2017-01-09 |
公开(公告)号: | CN106755459A | 公开(公告)日: | 2017-05-31 |
发明(设计)人: | 徐以兵;宋向阳;忻莹;唐金海;寿鑫;孟可馨;朱珍芳 | 申请(专利权)人: | 浙江大学;浙江省人民医院;南京医科大学第一附属医院;上海博慷生物科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 杭州求是专利事务所有限公司33200 | 代理人: | 邱启旺 |
地址: | 310058 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 检测 乳腺癌 引物 方法 | ||
1.一种用于检测乳腺癌的引物组,其特征在于,所述引物组可以包含a~e 5对引物,所述引物a的正向引物如SEQ ID No.1所示,引物a的反向引物如SEQ ID No.2所示,引物b的正向引物如SEQ ID No.3所示,引物b的反向引物如SEQ ID No.4所示,引物c的正向引物如SEQ ID No.5所示,引物c的反向引物如SEQ ID No.6所示,引物d的正向引物如SEQ ID No.7所示,引物d的反向引物如SEQ ID No.8所示,引物e的正向引物如SEQ ID No.9所示,引物e的反向引物如SEQ ID No.10所示。
2.一种用于检测乳腺癌的PCR检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将权利要求1所述的5对引物分别加入到单个PCR反应管中,并均加入核酸提取物、反转录酶、RNA酶抑制剂、DNA聚合酶、dNTP;其中,PCR反应的每个循环的条件为94摄氏度、30s;55摄氏度、30s;72摄氏度、10s;
(2)进行反转录和PCR反应,用琼脂糖凝胶电泳法进行检测。
3.一种用于检测乳腺癌的荧光定量PCR检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将权利要求1所述的5对引物分别加入到单个PCR反应管中,并均加入核酸提取物、反转录酶、RNA酶抑制剂、DNA聚合酶、dNTP;分别加入2×ChamQ SYBR qPCR Master Mix,其中,PCR反应的每个循环的条件为95摄氏度、10s和60摄氏度、30s;40个循环;每管设立三个复孔。
(2)进行反转录和PCR反应,并实时检测荧光。
(3)根据荧光检测结果计算出的Ct值,判断是否有靶基因表达于样品中。
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