[发明专利]通过在昆虫细胞中扩增遗传密码来制备工程化蛋白质的手段和方法

权利要求书

1.一种制备在其氨基酸序列中包含一个或多个相同或不同的非规范氨基酸(ncAA)残基的靶多肽(TP)的方法，所述方法包括以下步骤：

a)在所述一个或多个ncAA存在下，在昆虫细胞系(ICL)中表达所述TP，其中所述TP编码核苷酸序列(CS^TP)包含编码所述一个或多个ncAA残基的一个或多个选择密码子；并以任何顺序并发或顺序进行

b)在所述ICL中表达在所述TP的氨基酸序列中引入所述一个或多个ncAA残基所需的一种或多种正交细菌氨酰tRNA合成酶/tRNA^ncAA(O-RS/O-tRNA^ncAA)对，其中用于所述一种或多种细菌tRNA^ncAA(CS^tRNAncAA)的编码序列处于昆虫细胞来源的调控序列(RS^IC)的控制下；和

c)任选地回收表达的TP。

2.权利要求1所述的方法，其中所述ICL用携带表达所述TP和所述一种或多种O-RS/O-tRNA^ncAA对所需的遗传信息的一种或多种杆状病毒载体转染或转导。

3.权利要求1所述的方法，其中所述RS^IC选自

a)昆虫snRNA U6基因的调控序列，和

b)昆虫tRNA基因的调控序列，特别是H1调控序列。

4.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述RS^IC包含U6启动子，其中所述U6启动子选自对应于以下核苷酸残基的核苷酸序列

a)SEQ ID NO:1的1至400

b)SEQ ID NO:2的1至392

c)SEQ ID NO:3至8的1至385

d)其功能片段，所述功能片段包含a)至c)中定义的任一核苷酸序列的部分序列。

5.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述ICL选自灰翅夜蛾属细胞系，特别是草地贪夜蛾细胞系，优选Sf21(DSMZ Nr.ACC119)；或果蝇属细胞系，特别是黑腹果蝇细胞系，优选Schneider-2R+(果蝇基因组学研究中心(DGRC)货号150)。

6.一种杆状病毒载体，其包含一种或多种正交细菌氨酰tRNA合成酶/tRNA^ncAA(O-RS/O-tRNA^ncAA)对的编码序列，其中所述细菌tRNA^ncAA编码序列(CS ^tRNAncAA)置于昆虫-细胞来源的调控序列(RS^IC)的控制下。

7.权利要求6所述的载体，其中所述RS^IC包含U6启动子，其中所述U6启动子选自对应于以下核苷酸残基的核苷酸序列

a)SEQ ID NO:1的1至400

b)SEQ ID NO:2的1至392

c)SEQ ID NO:3至8的1至385

d)其功能片段，所述功能片段包含a)至c)中定义的任一核苷酸序列的部分序列。

8.一种昆虫细胞系(ICL)，其能够表达将一个或多个ncAA残基引入由所述ICL共表达的TP的氨基酸序列中所需的一种或多种正交细菌氨酰tRNA合成酶/tRNA^ncAA O-RS/O-tRNA^ncAA对，其中每个细菌tRNA^ncAA编码序列在昆虫细胞来源的调控序列(RS^IC)的控制下表达。

9.权利要求8所述的ICL，其中所述ICL用一种或多种携带表达所述TP和所述一种或多种O-RS/O-tRNA^ncAA对所需遗传信息的杆状病毒载体，特别是一种或多种如权利要求6和7之一所定义的载体转染或转导。