[发明专利]免疫突触的质量预测了嵌合抗原受体（CAR）T细胞的效能

权利要求书

1.一种确定包含嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞效力的方法，包括以下步骤:

(a)提供包含多个标记的肿瘤抗原的平面脂质双层；以及

将包含所述标记的肿瘤抗原的双层暴露于免疫细胞，所述免疫细胞包含一种或多种靶向所述抗原的嵌合抗原受体，由此产生结合到所述抗原的嵌合抗原受体复合物；以及

(b)通过执行以下中的四项或更多项来测量嵌合抗原受体与所述抗原之间的免疫突触的质量：

(1)测定标记复合物在所述脂质双层中的分布和/或强度；

(2)测定嵌合抗原受体的T细胞受体的ζ链或参与T细胞活化的另一信号分子的磷酸化形式；

(3)测定复合物处F-肌动蛋白的积累；

(4)测定复合物处穿孔素的极化；

(5)测定复合物处ζ链相关蛋白70(pZAP70)的积累；和

(6)测定复合物处淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)的积累；

其中，(1)至(6)中测量的所述免疫突触的质量预测包含一种或多种靶向所述抗原的嵌合抗原受体的所述免疫细胞的有效性；并且其中，执行所述(1)至(6)中的四项或更多项包括使用显微镜。

2.如权利要求1所述的方法，其中测定嵌合抗原受体的T细胞受体的ζ链磷酸化形式包括测定来自ζ链磷酸化形式的信号的强度和/或定位。

3.如权利要求2所述的方法，其中测定信号的强度和/或定位包括将复合物暴露于ζ链磷酸化形式的标记抗体。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中测定F-肌动蛋白在复合物处的积累包括测定来自F-肌动蛋白的信号的强度和/或定位。

5.如权利要求4所述的方法，其中测定来自F-肌动蛋白的所述信号的强度和/或定位包括将复合物暴露于F-肌动蛋白的标记抗体。

6.如权利要求5中任一项所述的方法，其中测定复合物处穿孔素的极化包括测定来自穿孔素的信号的强度和/或定位。

7.如权利要求6所述的方法，其中测定来自穿孔素的所述信号的强度和/或定位包括将复合物暴露于穿孔素的标记抗体。

8.如权利要求7中任一项所述的方法，其中测定pZAP70在复合物处的积累包括测定来自pZAP70的信号的强度和/或定位。

9.如权利要求8所述的方法，其中测定来自pZAP70的所述信号的强度和/或定位包括将复合物暴露于pZAP70的标记抗体。

10.如权利要求9中任一项所述的方法，其中测定所述复合物处Lck的积累包括测定来自Lck的信号的强度和/或定位。

11.如权利要求10所述的方法，其中测定来自Lck的所述信号的强度和/或定位包括将复合物暴露于Lck的标记抗体。

12.如权利要求1所述的方法，其中，所述显微镜包括共焦显微镜、表荧光显微镜、结构照明显微镜(SIM)、光活化定位显微镜(PALM)、随机光学重建显微镜(STORM)或受激发射损耗显微镜(STED)。