[发明专利]MVD作为用于鉴定免疫细胞特别是CD56+NK细胞的表观遗传标志物

说明书

本发明涉及用于鉴定CD56+NK细胞的方法，特别是体外方法，其包括分析哺乳动物甲羟戊酸(二磷酸)脱羧酶(MVD)的基因区中至少一个CpG位置的甲基化状态，其中当与非CD56+NK细胞相比时，所述基因区的去甲基化或缺乏甲基化指示CD56+NK细胞。本发明的分析可在表观遗传水平上鉴定CD56+NK细胞，并在复杂样品(例如其他血液细胞或免疫细胞)中将其与所有其他细胞区分。此外，本发明提供了特别是在复杂样品中定量CD56+NK细胞的改进的方法。可在没有纯化和/或富集细胞的步骤情况下，优选在全血和/或未经胰蛋白酶消化的组织中实施所述方法。

本发明涉及用于鉴定CD56+NK细胞的方法，特别是体外方法，其包括分析哺乳动物甲羟戊酸(二磷酸)脱羧酶(MVD)的基因区中至少一个CpG位置的甲基化状态，其中当与非NK细胞相比时，所述基因区的去甲基化或缺乏甲基化指示CD56+NK细胞。本发明的分析可在表观遗传水平上鉴定CD56+NK细胞，并在复杂样品(例如其他血液细胞或免疫细胞)中将其与所有其他细胞区分。此外，本发明提供了特别是在复杂样品中定量CD56+NK细胞的改进的方法。可在没有纯化和/或富集细胞的步骤情况下，优选在全血和/或未经胰蛋白酶消化的组织中实施所述方法。

此外，本发明涉及用于实施上述方法的试剂盒及其相应的用途。本发明一个目的是提供一种定量检测和测量哺乳动物的任何实体器官或组织或任何体液内的血液CD56+NK细胞的新的、更稳健的手段。

发明背景

自然杀伤细胞或NK细胞是一种类型的对先天性免疫系统至关重要的细胞毒性淋巴细胞。NK细胞发挥的作用类似于脊椎动物适应性免疫应答中的细胞毒性T细胞。NK表达NCAM-1分子，其聚集为CD56。NK细胞的另一经典标志物是FcγRIII，也称为CD16。基于表面标志物CD16和CD56的相对表达，NK细胞可以细分为不同的群体。两个主要的子集分别是CD56^亮CD16^暗/-和CD56^暗CD16⁺。在血液中，至少有两个淋巴细胞群体(作为NK细胞)表达CD56，包括CD3+细胞，即表达NK标志物和T细胞标志物的一组细胞，有时称为NKT细胞。CD3⁺CD56⁺细胞代表其他NK T细胞群体之一。

尽管个体中几乎所有的细胞都含有完全相同的DNA编码的互补物，但是高等生物必须在不同类型的组织中施加并保持不同的基因表达模式。大多数基因调控是瞬时的，这取决于细胞的当前状态和外部刺激的变化。另一方面，持续性调控是表观遗传学的主要作用—不改变DNA的基本遗传编码的可遗传的调控模式。DNA甲基化是表观遗传调控的典型形式；它作为细胞的稳定记忆，在维持各种细胞类型的长期身份中发挥着至关重要的作用。最近发现了其他形式的表观遗传调控。除了“第五个碱基”5-甲基胞嘧啶(mC)，可发现第六个(5-羟甲基胞嘧啶，hmC)、第七个(5-甲酰基胞嘧啶，fC)和第八个(5-羧基胞嘧啶，cC)碱基(Michael J.Booth et al.Quantitative Sequencing of 5-Methylcytosine and 5-Hydroxymethylcytosine at Single-Base Resolution Science 18May 2012,Vol.336no.6083pp.934-937)。

所提到的DNA修饰的主要靶标是两个核苷酸的序列胞嘧啶-鸟嘌呤(“CpG位点”)；在此情况下，胞嘧啶(C)可经简单的化学修饰以变成甲酰化的、甲基化的、羟甲基化的或羧化的。在人类基因组中，除了在被称为“CpG岛”的某些相对密集簇之外，CG序列比预期更罕见。CpG岛通常与基因启动子相关，估计超过一半的人类基因具有CpG岛(Antequera andBird,Proc Natl Acad Sci USA 90:11995-9,1993)。