[发明专利]CYP2C19和ABCB1基因检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于氯吡格雷个体户用药相关基因SNP位点检测的技术，具体而言是利用多重PCR技术、单碱基延伸技术和质谱技术，对与氯吡格雷相关的6个基因多态位点进行检测的产品和用途。

背景技术

氯吡格雷(Clopidogel)是一种新型噻吩吡啶类的抗血小板药物，能和阿司匹林联合使用是预防和治疗急性冠脉综合征(ACS)缺血事件反复发作、接受金属支架或药物释放支架植入手术的经皮冠脉介入治疗(PCI)患者以及急性心肌梗死的标准疗法。氯吡格雷为药物前体(prodrug)，本身无活性，氯吡格雷约50％经胃肠道吸收后在肝脏内迅速代谢，血浆中原形药物浓度极低。氯吡格雷在小肠的吸收受到ABCB1基因编码的质子泵P糖蛋白(P‐glycoprtein,P‐gp)调控，大部分药物前体通过酯酶代谢为无活性物质(主要是SR‐26334)，进入体内经肝脏药物代谢酶(主要是CYP3A4、CYP3A5、CYP2C19)氧化产生具有活性的代谢物(主要是SR‐6334)，该活性代谢产物不可逆的阻断血小板膜上的二磷酸腺苷(ADP)受体，从而阻止了血小板聚集，即发挥抗血小板作用。

然而，在服用包括氯吡格雷在内的血小板抑制剂的患者中，心血管事件反复发作的绝对危险性仍然相对较高。在氯吡格雷的临床治疗存在个体差异，表现为氯吡格雷抵抗(clopidogrel resistance，CR)，甚至表现为无反应。其中部分原因由于患者对于氯吡格雷代谢酶基因存在基因多态性(SNP)而导致代谢酶的活性降低或完全丧失，从而影响了氯吡格雷的疗效。

陈劲松等(氯吡格雷反应性差异的分子机制研究进展，《医学综述》，2011年第3期)报道了参与氯吡格雷代谢的主要药物代谢酶包括:CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A等，其中CYP1A2、CYP2B6、CYP2C19参与氯吡格雷第一阶段转化，CYP2C9、CYP2C19、CYP2B6、CYP3A参与第二阶段转化。其中，CYP2C19酶蛋白在氯吡格雷的代谢活化中起重要作用，编码该酶蛋白的基因CYP2C19在人体内呈多态性表达。虽然CYP2C19的突变体有CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP2C19*4、CYP2C19*5，但其中与氯吡格雷代谢相关的最主要突变体为CYP2C19*2，其次是CYP2C19*3。

随着对CYP2C19的多态性位点与氯吡格雷代谢的相关性的研究深入，祝锦等(氯吡格雷药物基因组学研究进展，《中国新药杂志》，2013年第15期)报道了中国人群的氯吡格雷抵抗主要受CYP2C19*2、CYP2C19*3的位点多态性影响。通过对该位点进行基因检测以及通过选择适当的个性化治疗方案可以帮助携带CYP2C19*2、CYP2C19*3等位基因的患者减少危险，增加氯吡格雷的有效性和安全性。但对于其他SNP位点(如ABCB1、CYP2B6)是否影响氯吡格雷的代谢还有待研究。

蔡泓敏等(CYP2C19基因多态性与氯吡格雷抗凝作用的相关性研究，《中国药物应用于监测》，2013年第5期)、张园等(氯吡格雷低反应性与CYP2C19基因多态性分布的研究，《内蒙古医学杂志》，2014年第2期)分别报道了在我国人群中服用氯吡格雷的患者检测CYP2C19*2和*3、CYP2C19*1和*2具有临床指导意义。

此外，有研究表明，ABCB1基因也与氯吡格雷抵抗的机制有关。ABCB1转运蛋白家族(ATP binding cassette transporter Family)是一类跨膜蛋白，其主要功能是利用ATP水解产生的能量将与其结合的底物等主动转出质膜，ABCB1基因在人类多药耐药基因族中起主导作用，其表达受各种因素的影响，属于可调控基因。

刘俊等(基因型检测在氯吡格雷个体化抗血小板治疗中的应用价值，《中国药房》，2014年第12期)报道了CYP2C19和ABCB1基因多态性与氯吡格雷疗效存在明显关联性，尤其是CYP2C19基因多态性是导致氯吡格雷疗效差异的重要影响因素。这说明在我国人群中服用氯吡格雷的患者检测CYP2C19*2和*3以及ABCB1基因型具有临床指导意义。

目前，氯吡格雷药物代谢基因多态性位点检测的实验方法为PCR‐荧光探针法和PCR毛细电泳片段分析法等，这些技术不同程度地存在实验周期长、单位实验通量成本较高、多个子平台(子系统)之间衔接的兼容性差、结果判定的主观性较大等缺点。