[发明专利]活性提高的脂肪酶及其应用

说明书

本发明涉及活性提高的脂肪酶及其应用。具体而言，本发明提供一种融合蛋白，所述融合蛋白是脂肪酶与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)来源的内切葡聚糖酶II的纤维素结合域形成的融合蛋白。本发明还提供相应的多核苷酸序列，核酸构建物，宿主细胞及方法和应用。本发明将某种特定CBD序列融合到脂肪酶末端，显著提高了该脂肪酶的比酶活、热稳定性和甲醇耐受性。

技术领域

本发明涉及活性提高的脂肪酶及其应用。

背景技术

脂肪酶是一类特殊的酰基水解酶，能够在油-水界面上催化酯水解、酯合成、酯交换、及立体异构体拆分等化学反应，常被应用于食品、日化、生物能源等领域，特别是在乳制品工业、家具清洁产品、油脂化学和医疗领域(治疗肥胖和动脉粥样硬化等)。为了更好地使其适应工业化需求，研究者们对其热稳定性，产量和活性的改造投入了很多精力。

纤维素结合域(Cellulose binding domain，CBD)是存在于纤维类原料酶(如纤维素酶)中的相对分子质量在0.4×10⁴－2.0×10⁴不等的片段，可特异结合纤维素基质(纤维素酶的底物)。因此，CBD序列很容易被想到用来与纤维素酶融合，改善其对底物的结合能力以及本身的酶活〔Naohisa Sugimoto、Kiyohiko Igarashi、Masahiro Samejima，Celluloseaffinity purification of fusion proteins tagged with fungal family1cellulose-binding domain，Protein Expression and Purification，2012；82，290-296；M.A.Lemos、J.A.Teixeira、M.R.M.Domingues、M.Mota、F.M.Gama，The enhancement ofthe cellulolytic activity of cellobiohydrolase I and endoglucanase by theaddition of cellulose binding domains derived from Trichoderma reesei，Enzymeand Microbial Technology，2003，32:35-40；Markus Linder、Irma Salovuori、LauraRuohonen和Tuula T.Teeri，Characterization of a Double Cellulose-bindingDomain，The Journal of Biological Chemistry，1996，271，No.35，21268-21272；Jantaporn Thongekkaew、Hiroko Ikeda、Kazuo Masaki、Haruyuki Iefuji，Fusion ofcellulose binding domain from Trichoderma reesei CBHI to Cryptococcus sp.S-2cellulase enhances its binding affinity and its cellulolytic activity toinsoluble cellulosic substrates，Enzyme and Microbial Technology，2013，52:241-246〕。但CBD与酶融合表达后，CBD会改变酶的性质，导致对酶性质的改变效果具有不可预判性。

发明内容

本发明第一方面提供一种融合蛋白，所述融合蛋白是脂肪酶与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)来源的内切葡聚糖酶(THEG)II的纤维素结合域形成的融合蛋白。

在一个或多个实施方案中，所述脂肪酶为Thermomyces dupontii来源的脂肪酶、疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)来源的脂肪酶或米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)来源的脂肪酶。