[发明专利]一种纯化制备高品质生物多糖的方法

权利要求书

1.一种β-葡聚糖的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）将裂褶菌发酵液与4倍体积的蒸馏水混合，60℃下浸煮8h；

（2）将浸煮液在4000rpm离心5min，取上清液；将上清液用300目的滤布负压过滤，取滤出清液待用；

（3）将步骤（2）过滤后的浸煮液加热至50℃，向其中同时加入200目的木质活性炭及8~16目的椰壳活性炭，每种活性炭的添加体积为浸煮液体积的1%；于50℃，350rpm条件下持续搅拌4h，冷却后待用；将上述冷却待用的混合有活性炭的浸煮清液，依次使用300目滤布及SCP-321#滤板进行负压抽滤，取过滤后的清液待用；

（4）将步骤（3）过滤后的清液与95%浓度的食用乙醇混合，体积比为1：3，搅拌，直至β-葡聚糖析出；和

（5）将步骤（4）得到的析出物置于带孔托盘中，使用电热烘箱40℃烘干，直至恒重，得干燥的β-葡聚糖；

其中，所述裂褶菌发酵液通过如下步骤制备得到：

（a）裂褶菌菌种活化：将马铃薯200g/L、葡萄糖30g/L、氯化钠10g/L、琼脂20g/L制成平板培养基，把裂褶菌菌种接种到该平板培养基上，于25℃恒温培养箱内培养7天得到平板菌丝体；

（b）种子活化：将马铃薯淀粉100g/L、葡萄糖40g/L、酵母浸膏2g/L、酵母浸粉2g/L、水制成的液体培养基装入摇瓶，装液量为1/3，取步骤（a）所得的平板菌丝体接种该摇瓶，于25℃恒温摇床内160rpm震荡培养培养7天，作为种子液；

（c）发酵培养：将葡萄糖50g/L、蔗糖50g/L、黄豆粉5g/L、酵母浸粉2g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、七水合硫酸镁0.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硝酸钾6g/L、水制成的发酵培养基加入发酵罐中121℃灭菌15分钟，再将步骤（b）所得的种子液接种上述发酵罐中，25℃恒温300rpm搅拌4Lpm通气发酵培养8天，从而制得所述裂褶菌发酵液。

2.一种β-葡聚糖的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）将裂褶菌发酵液与1倍体积的蒸馏水混合，90℃下高温浸煮0.5h；

（2）将步骤（1）得到的裂褶菌发酵浸煮液3000rpm离心60min，取上清液；上清液中加入2%硅藻土后，用300目的滤布负压过滤，取滤出清液待用；

（3）在步骤（2）过滤后的浸煮液中，加入浸煮液体积的2%的200目木质活性炭，300rpm室温搅拌5min，至搅拌均匀后，于4℃静置16h；将上述含有活性炭的混合液，依次使用300目滤布及SCP-321#滤板进行负压抽滤，取过滤后的清液待用；

（4）将步骤（3）过滤后的清液与95%浓度的食用乙醇混合，体积比为1：1，并搅拌，直至β-葡聚糖析出；向上述析出物中加入适量纯水并补充至总体积达到醇析前清液的体积，持续搅拌直至醇析物充分溶解；将溶解后的β-葡聚糖溶液再次与95%浓度的食用乙醇混合，体积比为1：2，搅拌，直至β-葡聚糖析出；将β-葡聚糖析出物转移至新的95%浓度的食用乙醇中，浸泡过夜，得到乙醇洗涤后的β-葡聚糖析出物；和

（5）将步骤（4）得到的析出物置于托盘中，置于电热烘箱中40℃干燥，直至恒重，得β-葡聚糖干燥物；

其中，所述裂褶菌发酵液通过如下步骤制备得到：

（a）裂褶菌菌种活化：将马铃薯200g/L、葡萄糖30g/L、氯化钠10g/L、琼脂20g/L制成平板培养基，把裂褶菌菌种接种到该平板培养基上，于25℃恒温培养箱内培养7天得到平板菌丝体；

（b）种子活化：将马铃薯淀粉100g/L、葡萄糖40g/L、酵母浸膏2g/L、酵母浸粉2g/L、水制成的液体培养基装入摇瓶，装液量为1/3，取步骤（a）所得的平板菌丝体接种该摇瓶，于25℃恒温摇床内160rpm震荡培养培养7天，作为种子液；

（c）发酵培养：将葡萄糖50g/L、蔗糖50g/L、黄豆粉5g/L、酵母浸粉2g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、七水合硫酸镁0.5g/L、硫酸铵0.5g/L、硝酸钾6g/L、水制成的发酵培养基加入发酵罐中121℃灭菌15分钟，再将步骤（b）所得的种子液接种上述发酵罐中，25℃恒温300rpm搅拌4Lpm通气发酵培养8天，从而制得所述裂褶菌发酵液。