[发明专利]分泌抗小麦矮缩病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

本发明公开了一种分泌抗小麦矮缩病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗的应用。用原核表达的小麦矮缩病(WDV)CP重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗WDV单抗的杂交瘤细胞株23F4，其保藏号为CGMCC No.13297。该杂交瘤细胞株分泌的单抗腹水间接ELISA效价达到10^‑9，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链。该单抗与WDV外壳蛋白有特异性反应。利用23F4单抗为核心建立检测小麦植物中WDV的ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法，这两种方法检测病叶的灵敏度分别达到1:163 840和1:5 120倍稀释(w/v,g/mL)。该杂交瘤细胞株及其单抗的获得和血清学检测方法的建立为该病毒病的检测、诊断及科学防控提供了物质和技术支撑。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗小麦矮缩病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

背景技术

小麦矮缩病(Wheat dwarf disease)是目前危害小麦生产的主要病毒病害之一。1961年Vacke在捷克斯洛伐克发现小麦出现了矮化现象，他认为这是由叶蝉传播的一种病毒引起的，并将其命名为小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus，WDV)。在中国小麦矮缩病最早于2007年在陕西韩城发现，当时发病面积达到1万亩，发病田平均病株率达到80％。目前，该病在河北、云南、山西、甘肃、河南等我国的13个主要小麦生产省份也相继发生。

小麦矮缩病病株在田间常呈块状出现，其典型症状是植株严重矮缩、黄化、条斑、分蘖增多、抽穗减少或不抽穗等，使小麦产量大幅度降低，最高可减产80％以上。小麦在拔节前受到WDV侵染会造成植株矮缩，轻者株高20cm，重者仅10cm，且植株不再增高；拔节后的小麦受侵染会造成分蘖长短不一，根部产生众多的小分蘖。发病严重的植株在拔节前即死亡，发病较轻的植株虽能拔节，但多不抽穗，即使抽穗，籽粒也不实。

小麦矮缩病毒属于双生病毒科(Geminiviridae)玉米线条病毒属(Mastrevirus)。病毒粒子呈现孪生颗粒状态，颗粒直径为18nm，20面体对称。WDV基因组是由2739-2750个核苷酸组成的环状单链DNA，由4个编码区和2个非编码区组成。WDV的病毒链含有V1和V2两个开放阅读框，分别编码运动蛋白(MP)和衣壳蛋白(CP)；反义链含有C1和C2两个开放阅读框，分别编码两个复制酶相关蛋白酶(Rep和Rep A)。非编码区由短非编码区(Shortintergenic region，SIR)和长非编码区(Long intergenic region，LIR)组成。

WDV的主要传播介体是异沙叶蝉(Psammotettix alienus Dahlb)，以持久性非增殖方式在田间传播。异沙叶蝉秋季时在多种秋作作物和杂草上产卵以越冬，卵在春季开始孵化。初春时小麦返青，带毒的异沙叶蝉在麦田危害并传播WDV。夏季小麦收割后，成虫迁至秋季作物及杂草上。此时，田间杂草和多种作物既是WDV的寄主，也是异沙叶蝉生息的场所，为WDV传播提供了毒源。秋季杂草枯萎，异沙叶蝉转移到新出苗的小麦田，小麦出苗越早，叶蝉对其危害越重，若此时叶蝉带毒，小麦发病会很严重。温度等环境因素是影响异沙叶蝉的关键性因素。当温度超过15℃时，异沙叶蝉群体数量显著增加，秋季低温可以降低叶蝉的传毒能力。