[发明专利]小鼠ECM的制备方法及得到的不同来源的小鼠ECM和小鼠卵巢体内再生的方法

权利要求书

1.一种小鼠ECM的制备方法，其特征在于,包括以下步骤：

(1)取出小鼠的不同组织，将其置于不同浓度的洗涤剂中，处理不同的时间，然后使用灭菌水和PBS清洗洗涤剂，保证ECM中不含有洗涤剂；

(2)对制备的ECM进行组织学分析和生化分析，优选出最好的小鼠ECM。

2.根据权利要求1所述的小鼠ECM的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中洗涤剂为SDS和Triton中的一种或两种组合。

3.根据权利要求1所述的小鼠ECM的制备方法,其特征在于,所述组织为小鼠卵巢组织。

4.根据权利要求1所述的小鼠ECM的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)包括对ECM的组织切片进行H&E和DAPI染色，并对ECM的弹性蛋白、胶原和sGAG三种成分含量的测定以及残留DNA量对比分析。

5.如权利要求1所述的小鼠ECM的制备方法制得不同来源的小鼠ECM。

6.一种小鼠卵巢体内再生的方法，其特征在于，将权利要求5获得的小鼠ECM，移植回小鼠卵巢原位，不同时间点取出ECM，观察其再生情况，并且对再生卵巢从再生效率、组织学分析、免疫组织化学分析、基因表达情况和生殖能力检测五方面进行分析鉴定。

7.根据权利要求6所述的小鼠卵巢体内再生的方法，其特征在于，所述小鼠ECM移植回小鼠卵巢原位的方法：腹腔注射麻醉受体小鼠，用手术剪刀在背中线中部开口，用镊子在背侧将肌肉层扎破并伸入到体腔内，夹出与卵巢相连的脂肪组织，撕破卵巢包膜，夹取出卵巢，将制备好的ECM重新放回到卵巢包膜中，将其放回到体内，缝合伤口，做好标记。

8.根据权利要求6所述的小鼠卵巢体内再生的方法，其特征在于，所述再生效率＝回收再生卵巢数量/移植小鼠卵巢数量×100％，计算再生效率；所述的组织学分析使用常规H&E染色的方法。

9.根据权利要求6所述的小鼠卵巢体内再生的方法，其特征在于，所述免疫组织化学分析包括使用脱蜡、脱水、微波加热抗原修复、血清封闭、一抗孵育、二抗孵育、AP显色、复染、脱水、透明、封片、镜检。

10.根据权利要求6所述的小鼠卵巢体内再生的方法，其特征在于，所述基因表达情况采用PCR和qPCR两种实验方法验证不同基因的表达情况；所述生殖能力检测包括雌雄小鼠比例为2：1合笼，检查阴栓，观察其生仔情况。