[发明专利]一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台

说明书

本发明提供了一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台，其特征在于：通过将靶标接连于纳米载体蛋白的表面上，来提高抗原免疫原性；所述纳米载体蛋白为由载体蛋白制造而成的纳米颗粒。本发明通过将多肽表位陈列于纳米的蛋白颗粒表面，蛋白颗粒既为其提供T细胞表位、又作为纳米载体，使其具有合适的尺寸有利于抗原提呈细胞的识别吞噬；同时，通过重复展示B细胞表位，能有利于B细胞的识别，进而能增强免疫效果。

技术领域

本发明涉及纳米疫苗领域，具体地，涉及一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台。

背景技术

现有研究表明低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)为促进动脉粥样硬化的因子，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)为抗粥样硬化因子，现有动脉粥样硬化相关防治措施及研究大多致力于降低低密度脂蛋白胆固醇、升高密度脂蛋白胆固醇。

胆固醇酯转移蛋白(CETP，cholesteryl ester transfer protein)是调节HDL与LDL、VLDL间胆固醇转运的关键蛋白，动物研究表明以CETP的多肽构建疫苗可以降低LDL-C、升高HDL-C，同时有明显的预防动脉粥样硬化，前人研究证实该蛋白羧基末端的16个氨基酸序列CETP471-476(FGFPEHLLVDFLQSLS)可以用于该疫苗的研制，但是，目前基于CETP疫苗的研究都是分子的疫苗或少数的相关基因疫苗，一直没有成功进入临床是因为不能产生足够的抗体抑制CETP的活性、降低血清的LDL-C。

PCSK9是前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin9型(proprotein convertasesubtilisin-like/kexin type 9,PCSK9)是近年来发现的调节血浆中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量的关键蛋白质之一，并且被认为是冠状动脉心脏病(CHD)潜在治疗靶点。PCSK9可以促进肝细胞膜上LDLR降解，从而减少血清中LDL-C清除，所以抑制PCSK9能够显著地降低血清LDL-C的水平。实验结果表明PCSK9疫苗可以降低LDL-C，尤其与他汀类降脂药合用降脂效果明显优于单用他汀类降脂药，其中PCSK9207-223(NVPEEDGTRFHRQASKC)是目前较有潜力的表位候选。但尚没有文献直接研究PCSK9疫苗与动脉粥样硬化之间的直接关系，由于APOE会与LDLR结合，增加HDL-C的降解。

传统的疫苗是B细胞表位与载体蛋白分子直接或通过链接物间接结合，为其提供T细胞表位。目前尚未有该疫苗的纳米领域的研究。

发明内容

本发明旨在克服上述缺陷，提供一种能提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台，及利用该平台制造的具有高抗原免疫原性的纳米疫苗。

本发明提供了一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台，其特征在于：通过将靶标接连于纳米载体蛋白的表面，来提高抗原免疫原性；

上述纳米载体蛋白为由载体蛋白制造而成的纳米颗粒。

进一步地，本发明提供的一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台，其特征在于：上述将靶标接连于纳米载体蛋白表面上的具体方法为：纳米颗粒依次经，与含有双键的化合物A发生加成反应、与交联剂发生取代反应、与靶标发生加成反应后，获得纳米疫苗。

该含有双键的化合物A可以为烯烃及其衍生物、环烯烃及其衍生物、杂环烯烃及其衍生物；

具体如：碳原子数为1-10的烯烃及其衍生物、环戊烯及其衍生物、环己烯及其衍生物、吡咯及其衍生物(如：NEM)、呋喃及其衍生物等可以与-SH发生加成反应的化合物；

该交联剂可以选自任何一端可以与-NH₂基团发生取代反应，另一端可以与巯基发生取代反应的化合物，常用如：sulfo-smcc。

进一步地，本发明提供的一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台，其特征在于，具体工艺步骤如下所示：