[发明专利]一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台有效
申请号: | 201611193135.X | 申请日: | 2016-12-21 |
公开(公告)号: | CN106729681B | 公开(公告)日: | 2020-02-21 |
发明(设计)人: | 何斌;石学银;尤纱纱;李永勇;董海青 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学医学院附属新华医院 |
主分类号: | A61K39/00 | 分类号: | A61K39/00;A61K39/385;A61K47/64;A61P3/06 |
代理公司: | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人: | 杜蔚琼 |
地址: | 200092 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 提高 抗原 免疫原性 纳米 载体 蛋白 平台 | ||
1.一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台,其特征在于:通过将靶标接连于纳米载体蛋白的表面上,来提高抗原免疫原性;
所述纳米载体蛋白为由载体蛋白制造而成的纳米颗粒;
所述靶标选自氨基端增加有半胱氨酸的CETP;
所述纳米载体蛋白为通过热聚法制造的OVA纳米颗粒;
所述OVA纳米颗粒为粒径为30-100nm的纳米颗粒;
所述将靶标接连于纳米载体蛋白表面上的具体方法为:纳米颗粒依次经,与含有双键的化合物A发生加成反应、与交联剂发生取代反应、与靶标发生加成反应后,获得纳米疫苗;
所述含有双键的化合物A为可以与-SH发生加成反应的化合物,选自碳原子数为2-10的烯烃、环戊烯、环己烯、吡咯、呋喃;
所述交联剂选自任何一端可以与-NH2基团发生取代反应,另一端可以与巯基发生取代反应的化合物。
2.如权利要求1所述的一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台,其特征在于,具体工艺步骤如下所示:
步骤一、将纳米颗粒溶解于缓冲溶液中形成纳米溶液;
步骤二、将化合物A溶解于缓冲溶液中形成反应溶液一;
步骤三、将交联剂溶解于溶剂中形成反应溶液二;
步骤四、将靶标溶解于溶剂中形成靶标溶液;
步骤五、将纳米溶液和反应溶液一,在10-55℃的温度下,反应0.5-5小时;
步骤六、加入反应溶液二,在10-55℃的温度下,反应0.5-5小时;
步骤七、超滤;
步骤八、加入靶标溶液,在10-55℃的温度下,反应0.5-5小时;
步骤九、超滤后,冻干获得目标产物。
3.如权利要求2所述的一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台,其特征在于:
所述纳米颗粒与化合物A的质量比为5-20:1;
所述化合物A与交联剂的质量比为5-15:1;
所述纳米颗粒与靶标的质量比为1-9:1。
4.如权利要求2所述的一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台,其特征在于:
所述缓冲溶液选自TAE,TBE,蛋白电泳液,MES,SSC,SSPE,WB转膜液,TBS,PBS,DPBS,柠檬酸缓冲液;
所述缓冲溶液的pH优选为6-9;
所述溶剂选自ddH2O、DMF、DMSO、醇类、醚类、酮类、酯类中的一种或几种。
5.如权利要求1所述的一种提高抗原免疫原性的纳米化载体蛋白平台,其特征在于:
所述OVA纳米颗粒的制造方法如下所示:
步骤一、将OVA分子溶于溶剂中;
步骤二、加入缓冲溶液,进行混合;
步骤三、升温至50-80℃,搅拌反应1-5分钟;
步骤四、步骤三的产物经至少一次的透析后,冻干制得OVA纳米颗粒。
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