[发明专利]一种用于植物基因组定点碱基替换的载体

权利要求书

1.一种用于对植物进行基因编辑的核酸构建物，其特征在于，所述的核酸构建物包括：

第一表达盒；

第二表达盒；和

任选的第三表达盒；

其中，所述第一表达盒为用于表达gRNA的gRNA表达盒；

所述第二表达盒为用于表达融合蛋白的融合蛋白表达盒，所述的融合蛋白具有式Ia或Ib结构：

A-L1-B-L2-C(Ia)

B-L1-A-L2-C(Ia)

各式中，

A为胞嘧啶脱氨基酶；

L1为无或第一连接肽(如Xten)

B为无切割活性的Cas9或仅具有单链切割活性的Cas9；

L2为无或第二连接肽(如Xten)；

C为无或Uracil DNA glycosylase inhibitor(UGI)；

所述第三表达盒为用于表达筛选标记的筛选标记表达盒；

并且，所述的第一表达盒、第二表达盒、和第三表达盒各自独立地位于相同或不同的载体上。

2.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述的第一表达盒具有式A结构：

X1-X2-X3(A)

式中，

X1为植物启动子，优选植物聚合酶III驱动的启动子(如U6、U3启动子)；

X2为gRNA的编码序列；

X3为polyT。

3.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述的第二表达盒具有式B结构：

Y1-Y2-Y3(B)

式中，

Y1为植物启动子，优选UBI、CaMV35S、Actin启动子；

Y2为融合蛋白的编码序列，所述融合蛋白具有如上所述的式Ia或Ib结构；

Y3为终止子。

4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有如权利要求1所述的核酸构建物，其中，所述的第一表达盒、第二表达盒、和第三表达盒各自独立地位于相同或不同的载体上。

5.一种宿主细胞，其特征在于，所述细胞含有权利要求4所述的表达载体。

6.一种基因工程细胞，其特征在于，所述的细胞含有权利要求1所述的构建物，或其基因组整合有一个或多个权利要求1所述的构建物。

7.一种对植物进行基因编辑的方法，其特征在于，包括步骤：

(i)提供待编辑植物；

(ii)将权利要求4所述的表达载体导入所述待编辑植物。

8.一种制备转基因植物细胞的方法，其特征在于，包括步骤：

(i)将权利要求1所述的构建物、或权利要求4所述的载体转染植物细胞，使得所述构建物与所述植物细胞中的染色体发生定点突变，从而制得所述转基因植物细胞。

9.一种制备转基因植物细胞的方法，其特征在于，包括步骤：

(i)将权利要求1所述的构建物、或本权利要求4所述的载体转染植物细胞，使得所述植物细胞含有所述构建物，从而制得所述转基因植物细胞。

10.一种制备转基因植物的方法，其特征在于，包括步骤：

将权利要求8或9所述方法制备的所述转基因植物细胞再生为植物体，从而获得所述转基因植物。