[发明专利]一种鹿药多糖及其制备方法和应用

说明书

一种鹿药多糖及其制备方法和应用，涉及天然产物提取、分离纯化领域，填补了目前鹿药多糖成分研究的空白。制备鹿药多糖的方法，先将干燥的鹿药根茎及根粉碎，以蒸馏水超声提取，合并提取液减压浓缩后加入无水乙醇依次达到乙醇的体积分数为70％、80％、90％进行分级沉淀，静置、离心、冷冻干燥，得三种鹿药粗多糖；将上述三种鹿药粗多糖进行Sevag法脱蛋白，DEAE Sepharose FF柱色谱分离纯化，透析，Sephacryl S‑300柱色谱分离纯化后冷冻干燥得三种均一组分的鹿药多糖。本发明提供了一种操作简单、重复性好、污染小、效率高、方法学良好，适用于工业化大规模生产的提取分离纯化鹿药多糖的方法。

技术领域

本发明涉及天然产物提取、分离纯化技术领域，具体涉及一种鹿药多糖及其制备方法和应用。

背景技术

多糖(Polysaccharides)是由单糖连接形成的大分子物质，为生物体必需的生物大分子之一，在细胞识别、生物体受精、生长发育、神经系统和免疫系统衡态的维持等方面都起着重要作用。由于其特殊的结构、理化性质及生物活性，使得多糖在医药领域有广泛的应用，如疫苗、抗肿瘤或抗病毒药物，以及制备药物缓释剂、医用透析膜、人工血液、人工皮肤等。目前，有关多糖的化学结构、药理作用与机理、构效关系已成为生命科学研究中最活跃的领域之一。从不同生物体内提取的多糖具有不同的生理作用。

鹿药(Smilacinajaponica A.Gray)为百合科鹿药属多年生草本植物，我国野生鹿药资源分布十分广泛，储量巨大。鹿药为药食同源植物，地上部分的幼嫩茎叶从出苗到开花前均可食用，味道鲜美，是广受欢迎的山野菜；而地下部分的根茎及根为民间常用中药，性味“甘、苦、温，无毒”，具有补气益肾、祛风除湿、活血调经功能，用于治疗风湿骨痛、神经性头痛、乳腺炎、月经不调、痈疖肿毒、跌打损伤等症。目前，也有报道称，猪、鸡等养殖户将鹿药添加在饲料中喂养动物，以提高动物的免疫力。现代化学及药理研究显示鹿药根茎中含有黄酮、皂苷、多糖等活性成分，经研究发现鹿药中多糖含量较高，约占干燥生药的20％，且具有抗氧化和抑制肿瘤细胞增殖的作用。除上述研究外，未见有关鹿药多糖的研究报道。

发明内容

为了填补目前鹿药多糖成分研究的空白，本发明提供一种鹿药多糖及其制备方法和应用。

本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的一种鹿药多糖的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、超声水提

以水为溶剂对鹿药根茎及根进行超声提取，料液比1∶20，超声温度30℃，超声时间20min，超声提取3次，合并滤液，得到鹿药多糖水提取液；

步骤二、乙醇分级沉淀

将步骤一所得的鹿药多糖水提取液减压浓缩至原体积的1/10，加入无水乙醇至乙醇体积分数为70％，4℃放置24h后，7000r/min离心10min，分离出上清液得沉淀物，将所得沉淀物用无水乙醇和丙酮反复洗涤后冷冻干燥得70％乙醇沉淀鹿药粗多糖；向上清液中继续加入无水乙醇至乙醇体积分数为80％，按上述方法处理得到80％乙醇沉淀鹿药粗多糖；继续向上清液中加入无水乙醇至乙醇体积分数为90％，按上述方法处理得到90％乙醇沉淀鹿药粗多糖；

步骤三、纯化

将步骤二所得的70％乙醇沉淀鹿药粗多糖、80％乙醇沉淀鹿药粗多糖和90％乙醇沉淀鹿药粗多糖分别依次经脱蛋白、离子交换色谱柱分离纯化、透析、琼脂糖凝胶柱分离纯化、醇沉干燥后得到三种均一组分的鹿药多糖。

作为优选的实施例，所得的三种均一组分的鹿药多糖的比旋光度分别为-45°、-75°、-35°；以葡萄糖计所得的三种均一组分的鹿药多糖中的多糖含量分别为89.22％、93.05％、59.83％。

作为优选的实施例，所述脱蛋白的具体步骤为：