[发明专利]一种鹿药多糖及其制备方法和应用

权利要求书

1.鹿药多糖在制备促进猪小肠上皮细胞增殖方面的药物中的应用，其特征在于，所述鹿药多糖的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、超声水提

以水为溶剂对鹿药根茎及根进行超声提取，料液比1∶20，超声温度30℃，超声时间20min，超声提取3次，合并滤液，得到鹿药多糖水提取液；

步骤二、乙醇分级沉淀

将步骤一所得的鹿药多糖水提取液减压浓缩至原体积的1/10，加入无水乙醇至乙醇体积分数为70％，4℃放置24h后，7000r/min离心10min，分离出上清液，将所得沉淀物用无水乙醇和丙酮反复洗涤后冷冻干燥得70％乙醇沉淀鹿药粗多糖；向上清液中继续加入无水乙醇至乙醇体积分数为80％，按上述方法处理得到80％乙醇沉淀鹿药粗多糖；向上清液中继续加入无水乙醇至乙醇体积分数为90％，按上述方法处理得到90％乙醇沉淀鹿药粗多糖；

步骤三、纯化

将步骤二所得的70％乙醇沉淀鹿药粗多糖、80％乙醇沉淀鹿药粗多糖和90％乙醇沉淀鹿药粗多糖分别依次经脱蛋白、离子交换色谱柱分离纯化、透析、琼脂糖凝胶柱分离纯化、醇沉干燥后得到三种均一组分的鹿药多糖；

所得的三种均一组分的鹿药多糖的比旋光度分别为-45°、-75°、-35°；以葡萄糖计所得的三种均一组分的鹿药多糖中的多糖含量分别为89.22％、93.05％、59.83％。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤三中，所述脱蛋白的具体步骤为：

将步骤二所得的70％乙醇沉淀鹿药粗多糖、80％乙醇沉淀鹿药粗多糖和90％乙醇沉淀鹿药粗多糖分别配制成浓度为2mg/mL的多糖水溶液，采用Sevag法分别除蛋白6次，经冷冻干燥后得到三种脱蛋白的鹿药多糖。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，采用Sevag法除蛋白的工艺条件为：氯仿与正丁醇的体积比为4∶1，浓度为2mg/mL的多糖水溶液与Sevag试剂的体积比为2∶1，洗脱6次，每次振荡15min。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤三中，所述离子交换色谱柱分离纯化的具体步骤为：

将所得的脱蛋白的鹿药多糖加入蒸馏水溶解至浓度为45mg/mL，以离子交换色谱柱分离，依次采用超纯水及0.1～0.4mol/L NaCI溶液洗脱，采用苯酚-硫酸法检测，合并呈峰部分。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述离子交换色谱柱为DEAE SepharoseFF色谱柱，填料95mL。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤三中，所述透析的具体步骤为：

将所得的呈峰部分浓缩后以截留分子量4000Da的透析袋进行透析，先以自来水透析48h，再以蒸馏水透析24h，得到截留物质。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤三中，所述琼脂糖凝胶柱分离纯化的具体步骤为：

将所得的截留物质通过Sephacryl S-300色谱柱分离纯化，以超纯水洗脱，采用苯酚-硫酸法追踪检测，收集呈单峰的洗脱液，洗脱液依次经减压浓缩、无水乙醇沉淀、冷冻干燥后得到均一组分的鹿药多糖。