[发明专利]大黄鱼干扰素h基因启动子序列及其应用

说明书

大黄鱼干扰素h基因启动子序列及其应用，涉及干扰素IFNh基因启动子。提供大黄鱼IFNh基因启动子序列、大黄鱼IFNh基因启动子的活性分析方法、大黄鱼IFNh基因启动子的应用。采用基因组步移的方法克隆了大黄鱼IFNh基因启动子，提供了大黄鱼IFNh基因启动子序列；经报告基因分析实验证明了该大黄鱼IFNh基因启动子可被poly(I:C)、LPS、PGN及细菌基因组DNA诱导激活。该大黄鱼IFNh基因启动子的克隆及其强启动子活性的鉴定，在理论上将为研究大黄鱼IFNh基因的表达调控机理提供良好的实验系统，在应用方面为利用该启动子构建表达载体高效表达外源基因或将该启动子应用于转基因鱼构建创造了条件。

技术领域

本发明涉及干扰素IFNh基因启动子，尤其是涉及大黄鱼干扰素IFNh基因启动子序列及其应用。

背景技术

干扰素(Interferon，IFN)是一类能诱导脊椎动物细胞抗病毒状态，并在抗病毒防御中起重要作用的诱导性多基因家族细胞因子(1.Robertsen B.The interferon systemof teleost fish[J].Fish Shellfish Immunol,2006,20(2):172-191)。硬骨鱼类作为低等脊椎动物也拥有相对完善的干扰素系统。鱼类IFNs分为I型IFNs和II型IFNs两大类，其中I型IFNs因其专一性地协调宿主抗病毒免疫而受到更多的关注(2.Zhang YB,GuiJF.Molecular regulation of interferon antiviral response in fish[J].Dev CompImmunol,2012,38(2):193-202.)。根据成熟肽中半胱氨酸的数量及分布，鱼类I型IFNs分为group I IFN(成熟肽含2个半胱氨酸)和group II IFN(成熟肽含4个半胱氨酸)。Group IIFN包括IFNa、IFNd和IFNe 3个亚组，group II IFN包括IFNb、IFNc和IFNf3个亚组(3.ZouJ,Gorgoglione B,Taylor NG,et al.Salmonids have an extraordinary complex typeI IFN system:characterization of the IFN locus in rainbow trout oncorhynchusmykiss reveals two novel IFN subgroups[J].J Immunol,2014,193(5):2273-2286)。基因的表达调控已成为分子生物学研究领域的热点，启动子是基因表达调控的重要元件。鉴于鱼类I型IFNs在抗病毒免疫及病毒病防治中的重要性，研究其基因表达调控机制将为通过调节IFN的表达来防治鱼类病毒病提供新的思路。对鱼类I型IFNs基因5′侧翼调控区序列的分析表明，鱼类I型IFNs基因启动子存在多个转录因子结合位点，如IRF3、IRF7、NF-κB和ISRE等，并且具有复杂的表达调控机制。

本申请人在前期通过全基因组序列分析，发现了1条编码大黄鱼I型IFN的基因序列(4.Ao JQ,Mu YN,Xiang LX,et al.Genome sequencing of the perciform fishLarimichthys crocea provides insights into stress adaptation[J].Plos Genet,2015,11(4):e1005118)。同源比对及进化分析表明该I型IFN为1种新的鱼类I型IFN，暂命名为IFNh，属于鱼类group I IFNs。由于启动子是决定基因表达及其调控的关键因素，为研究大黄鱼IFNh基因的表达调控机制，从其基因组进一步克隆了大黄鱼IFNh基因的5′侧翼启动子序列，经报告基因检测实验证明了该大黄鱼IFNh基因启动子具有较强的启动子活性。该大黄鱼IFNh基因启动子的克隆及其启动子活性的验证，在理论上将为研究大黄鱼IFNh基因的表达调控机理提供良好的实验系统，在应用方面为利用该强启动子构建表达载体高效表达外源基因或将该启动子应用于转基因鱼构建创造了条件，具有重要的理论和实际意义。

发明内容

本发明的目的之一在于提供大黄鱼IFNh基因启动子的序列。