[发明专利]一种甲氨蝶呤胶乳免疫比浊测定试剂盒及其制备方法

说明书

一种甲氨蝶呤胶乳免疫比浊测定试剂盒及其制备方法。本发明提供测定人体血清中血药甲氨蝶呤含量的试剂盒：试剂R1和试剂R2以1:1组成。其重量百分配比为R1：0.01％～4％乳化剂、0.01％～4％甲氨蝶呤共轭物、0.1％～2％氯化钠、0.05％～2％增敏剂、0.02％防腐剂、30～100mmol/L缓冲液。R2：0.1％～0.5％结合有抗甲氨蝶呤抗体胶乳微粒、0.1％～1.0％牛血清白蛋白、0.02％～2％吐温20、0.02％～2％稳定剂2、0.02％～2％蛋白保护剂2、0.02％防腐剂、20～50mmol/L缓冲液。本发明试剂盒灵敏度和稳定性高，有较好的临床应用前景,本发明提供了制备方法。

技术领域

本发明涉及生物试剂，具体涉及检测试剂盒，尤其涉及一种灵敏度高、特异性强的胶乳免疫比浊法测定人体血清甲氨蝶呤含量的试剂盒及其制备方法。

背景技术

甲氨蝶呤(Methotrexate，MTX)是一种叶酸还原酶抑制剂，为抗叶酸类抗肿瘤药物，主要通过对二氢叶酸还原酶的抑制作用阻碍肿瘤细胞DNA的合成，从而抑制肿瘤细胞的生长和繁殖。其抗肿瘤机理是：甲氨蝶呤与叶酸结构即为相似，都属于蝶啶衍生物，故MTX能够结合到二氢叶酸还原酶的活性位置上，阻断四氢叶酸的形成。其选择性地作用于S期(DNA合成期)，属于细胞周期特异性药物。临床上在急性白血病(尤其是急性淋巴细胞性白血病)、绒毛膜上皮癌及恶性葡萄胎等方面的治疗效果较好。对头颈部肿瘤、乳腺癌、肺癌及盆腔肿瘤均有一定疗效，也可与其他药物联合治疗Burkitts淋巴瘤，晚期淋巴肉瘤(Ⅲ和Ⅳ期，Peter氏阶段系统)和晚期蕈样真菌病。

因甲氨蝶呤安全范围窄，服药后人体代谢和排泄的个体化差异大，低于其有效血药浓度则无法抑制肿瘤生长，高于其有效血药浓度会引起胃肠道反应、肝硬化、肾脏损害等副作用。该药的细胞毒性较大，不良反应较多，应密切监测患者血药浓度，做到个体化给药。因此，对服用甲氨蝶呤的患者进行血药浓度监测，减少不良反应及指导临床个体化安全用药具有重要意义。

目前，测定甲氨蝶呤的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、荧光偏振免疫分析法(FPIA)等。HPLC法操作繁琐，主要用于实验室分析，FPIA法需要配备昂贵的专用仪器，成本较高。因而，这些方法在临床应用上都具有一定的局限性。虽然已有可应用于生化分析仪的甲氨蝶呤测定试剂盒上市，但远不能满足临床需求。目前市场上仍缺乏稳定性好、灵敏度高、特异性强的甲氨蝶呤检测试剂，尤其是质量好的自动化检验试剂。因此，研发生产质量达到临床要求、实用性强、性价比高，可应用于全自动生化分析仪的甲氨蝶呤测定试剂已成为国内外体外诊断试剂行业的热点。

本发明的甲氨蝶呤胶乳免疫比浊测定试剂可以实现在全自动生化分析仪上对甲氨蝶呤的高通量、快速化检测，且具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，有效降低甲氨蝶呤检测成本，有利于临床推广使用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计一种在全自动生化分析仪上对甲氨蝶呤的快速、灵敏、准确检测的测定试剂及其制备方法。

本发明提供了一种甲氨蝶呤胶乳免疫比浊测定试剂盒。

本发明试剂盒由试剂R1和试剂R2组成。

所述试剂R1和试剂R2的体积比为1:1。

本发明试剂盒所述试剂R1由下列重量百分配比的组分组成：

0.01％～4％的乳化剂、0.01％～4％的甲氨蝶呤共轭物、0.1％～2％氯化钠、0.05％～2％的增敏剂、0.02％的防腐剂、88.00％～99.80％的30～100mmol/L缓冲液。

所述试剂R1为与抗甲氨蝶呤特异性抗体结合的共轭竞争反应液。

所述试剂R1所述乳化剂选自吐温20、吐温80或聚乙二醇辛基苯基醚。