[发明专利]用于促进鱼的生长的手段和方法

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了用于促进鱼的生长的手段和方法。具体地，本发明提供了一种工程质粒、重组蛋白、重组枯草芽孢杆菌、动物食物/饲料添加剂，制备重组枯草芽孢杆菌的方法，制备培养物溶解产物的方法，和提高鱼的生长速率的方法。使用本发明提供的动物食物/饲料添加剂喂养鱼，可以促进鱼的生长。

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年12月9日提交的香港专利申请号15112136.3的优先权或权益，通过引用将其全文结合到本文中。

技术领域

本发明涉及用于促进鱼的生长的生物工程手段和方法。

背景技术

生长速率是渔业(fish farm)认为最重要的焦点之一，因为在生长性能和产量(由此获得的利润)之间存在直接关系。因此，在该行业中已经进行过不同的尝试以提高鱼的生长速率。

鱼生长激素(FSH)被提出用于促进鱼的生长。使用FSH促进鱼生长的一种方式是在溶解有FSH的水浴中浸泡鱼。然而，该方式存在较严格的限制。例如，在大规模中，以该方式使用FSH是低效的、昂贵的且不切实际的。第二，许多鱼不能以这种方式很好地吸收FSH。另一个限制在于，尚不清楚食用以这种FSH处理的鱼是否安全。

本发明寻求解决上述问题，或至少为公众提供有用的备选。

发明内容

根据本发明的第一方面，提供了一种在枯草芽孢杆菌(B.subtilis)宿主中表达编码荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)的鱼生长激素(tiGH)的基因的方法，该方法包括以下步骤：

—制备重组DNA表达盒(DNA cassette)，所述DNA表达盒从5’端到3’端包括：三对

—以串联的形式存在的vegA启动子(vegA)和lac操纵基因(lacO)、

枯草芽孢杆菌共有核糖体结合位点(RBS)、ATG起始密码子、

编码所述tiGH的DNA序列和编码6个组氨酸残基(6x His标签)的DNA低聚核苷酸序列；

—在枯草芽孢杆菌或大肠杆菌(E.coli)的穿梭载体中插入所述DNA表达盒，从而形成重组构建体3vegAtiGHH6；

—将所述重组构建体转化至所述枯草芽孢杆菌宿主中；

—使所述枯草芽孢杆菌宿主在细胞培养物中生长并且在细胞内表达所述tiGH；和

—使用French压力匀浆器(French press homogenizer)，通过机械溶解所述枯草芽孢杆菌，释放所述tiGH。

根据本发明的第二方面，提供了一种在枯草芽孢杆菌宿主中表达编码荷那龙罗非鱼的鱼生长激素(tiGH)的基因的方法，该方法包括以下步骤：

—制备重组DNA表达盒，所述DNA表达盒包括：至少一对vegA启动子(vegA)和lac操纵基因(lacO)、枯草芽孢杆菌共有核糖体结合位点、ATG起始密码子、编码所述tiGH的DNA序列和编码6个组氨酸残基(6x His标签)的DNA低聚核苷酸序列；

—在枯草芽孢杆菌或大肠杆菌的穿梭载体中插入所述DNA表达盒，从而形成重组构建体3vegAtiGHH6；

—将所述重组构建体转化至所述枯草芽孢杆菌宿主中；

—使所述枯草芽孢杆菌宿主在细胞培养物中生长并且在细胞内表达所述tiGH；和

—释放所述tiGH。