[发明专利]用于促进鱼的生长的手段和方法

权利要求书

1.一种在枯草芽孢杆菌宿主中表达编码荷那龙罗非鱼（Oreochromis hornorum）的鱼生长激素的基因的方法，该方法包括以下步骤：

—制备重组DNA表达盒，所述DNA表达盒从5’端到3’端包括：三对以串联的形式存在的vegA启动子和lac操纵基因、其后为枯草芽孢杆菌共有核糖体结合位点、ATG起始密码子、编码所述荷那龙罗非鱼的鱼生长激素的DNA序列和编码6个组氨酸残基的DNA低聚核苷酸序列；

—在枯草芽孢杆菌或大肠杆菌的穿梭载体中插入所述DNA表达盒，从而形成重组构建体3vegAtiGHH6；

—将所述重组构建体转化至所述枯草芽孢杆菌宿主中；

—使所述枯草芽孢杆菌宿主在枯草芽孢杆菌细胞培养物中生长并且在细胞内表达所述荷那龙罗非鱼的鱼生长激素；和

—通过溶解所述枯草芽孢杆菌释放所述荷那龙罗非鱼的鱼生长激素。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述荷那龙罗非鱼的鱼生长激素为22kDa的单一多肽。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述重组DNA表达盒从5’端到3’端包括：三对以串联的形式存在的vegA启动子和lac操纵基因、其后为枯草芽孢杆菌共有核糖体结合位点、ATG起始密码子、编码所述荷那龙罗非鱼的鱼生长激素的DNA序列和编码6个组氨酸残基的DNA低聚核苷酸序列。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述穿梭载体为6.62-kb大小的pMTLBs72。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，所述穿梭载体为6.62-kb大小的pMTLBs72。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在IPTG诱导剂和/或氯霉素抗生素的存在下，使转化后的枯草芽孢杆菌宿主生长，直至对数晚期或稳定期。

7.根据权利要求3所述的方法，其中，在IPTG诱导剂和/或氯霉素抗生素的存在下，使转化后的枯草芽孢杆菌宿主生长，直至对数晚期或稳定期。

8.根据权利要求1或2所述的方法，所述方法包括将所述枯草芽孢杆菌宿主的细胞离心下来以获取所述荷那龙罗非鱼的鱼生长激素的步骤。

9.根据权利要求3所述的方法，所述方法包括将所述枯草芽孢杆菌宿主的细胞离心下来以获取所述荷那龙罗非鱼的鱼生长激素的步骤。

10.根据权利要求1或2所述的方法，其中，通过使用French压力细胞匀浆器，以机械的方式实现所述荷那龙罗非鱼的鱼生长激素的释放。

11.根据权利要求3所述的方法，其中，通过使用French压力细胞匀浆器，以机械的方式实现所述荷那龙罗非鱼的鱼生长激素的释放。

12.一种制备鱼饲料的方法，该方法包括权利要求1、2或3所述的方法。

13.一种工程质粒，该工程质粒含有：按以下顺序包括至少三对vegA启动子和lac操纵基因的编码序列、其后为共有核糖体结合位点、编码荷那龙罗非鱼的鱼生长激素的基因和编码6-组氨酸密码子的序列。

14.含有权利要求13所述的工程质粒的重组枯草芽孢杆菌。

15.一种动物食物或饲料添加剂，该动物食物或饲料添加剂含有权利要求14所述的重组枯草芽孢杆菌的细胞。