[发明专利]一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括以下组成部分：破乳剂、注射器、比色卡；所述试剂盒还包括快速检测试纸或96孔板；所述破乳剂为含0.33％体积分数盐酸的乙醇溶液、含0.05％体积分数三氟乙酸的乙腈溶液中的一种。采用本发明的试剂盒可快速定量定性检测油佐剂疫苗中的蛋白含量，该试剂盒制作简单，操作简便，无需进行繁琐的预处理，且检测结果准确，为口蹄疫疫苗行业提供了一种快速有效的检测手段。

技术领域

本发明涉及口蹄疫疫苗检测技术领域，具体涉及一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

市场上现有的口蹄疫疫苗主要分为灭活疫苗和合成肽疫苗，其抗原核心本质为蛋白质，对疫苗内抗原进行检测主要为检测疫苗破乳后水相中的蛋白质含量。但是，口蹄疫疫苗是由抗原与佐剂以一定比例、按特定程序乳化而成的，由于抗原被油佐剂所包裹，无法直接进行检测。虽然业内已有破乳方法，但其效率和效果均不佳，破乳后会有种种问题，例如破乳不完全、水相和油相分界不清晰、水相中检测不到抗原等问题一直困扰着业界。

现有的疫苗质量标准中规定效力检验必须采用本动物进行检验，由于国家实行100％的强化免疫政策，很难选出易感的检验用动物，而且动物攻毒对实验设施要求高(BSL3级实验室)、耗时长(一个月以上)、资金花费大。如果采用血清中和试验选择易感动物，在技术上难以排除具有细胞免疫的非易感动物，在检验实际中经常发生检验数据不规律的问题，影响检验的准确性。因此口蹄疫疫苗尤其是用于牛的疫苗的质量检测一直困扰着兽药监测部门和相关生产企业。因此需要尽快研制体外检验技术，代替现有的本动物试验。

口蹄疫疫苗如何检测，如何评价等问题一直困扰着生产厂家和用户。当前国家对疫苗的检验正逐步过渡到对疫苗内抗原的检测，而当前较为普遍的方法为疫苗破乳后对抗原进行检测，通过将疫苗进行破乳处理，使抗原转移至水相中，继而对其进行后续的检测分析，虽然蛋白检测方法较多，但是由于破乳、佐剂干扰等问题无法解决，因此业内还没有能够对口蹄疫疫苗进行检验的统一且准确的方法，对于疫苗用户而言更缺乏快速定性定量的检测方法。因此，寻找一种能快速简单且经济实用的蛋白质检测试剂已经刻不容缓了。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒及其检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒，所述试剂盒包括以下组成部分：破乳剂、注射器、比色卡；所述试剂盒还包括快速检测试纸或96孔板；所述破乳剂为含0.33％体积分数盐酸的乙醇溶液、含0.05％体积分数三氟乙酸的乙腈溶液中的一种。所述三氟乙酸和盐酸类似催化剂，可促进破乳，加速乳化膜的破解。

更优选地，所述破乳剂为含0.05％体积分数三氟乙酸的乙醇溶液。由于乙醇无毒，且性价比高。

优选地，所述快速检测试纸经考马斯亮蓝G-250、乙醇、磷酸的混合液浸渍。

优选地，所述96孔板各孔内均加入考马斯亮蓝G-250、乙醇、磷酸的混合液，然后以封板膜封口。

优选地，所述混合液中，考马斯亮蓝G-250的终浓度为0.1mg/ml，乙醇的体积终浓度为5％，磷酸的体积终浓度为8.5％。

优选地，所述比色卡为根据不同浓度的标准牛血清蛋白溶液使用所述快速检测试纸显色后制成。

优选地，所述比色卡为根据不同浓度的标准牛血清蛋白溶液滴入96孔板内显色后制成。

优选地，所述标准牛血清蛋白溶液的浓度分别为：10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml、50ug/ml、60ug/ml、70ug/ml、80ug/ml、90ug/ml、100ug/ml。