[发明专利]一种五味子体细胞胚及其培养方法、培养基及应用有效
| 申请号： | 201611106501.3 | 申请日： | 2016-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN106754629B | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 孙丹;艾军;秦洪艳;许培磊;赵滢;刘迎雪;王振兴;杨义明;范书田 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院特产研究所 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C08H7/00 |
| 代理公司： | 11371 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 孙海杰 |
| 地址： | 130112 吉林省长*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 体细胞胚 五味子 培养基 木质素 细胞培养 次生代谢产物 体细胞胚诱导 组织培养技术 产业化开发 工厂化生产 木质素合成 通气量 氮源 生长 应用 生产 | ||
1.一种五味子体细胞胚的培养方法，其特征在于，其包括：
取五味子外植体进行前诱导培养，得到五味子胚性愈伤组织；
将所述五味子胚性愈伤组织接种至体细胞胚诱导培养基中，进行体细胞胚诱导培养，得到含木质素的体细胞胚；
其中，所述体细胞胚诱导培养基由每升1/2 MS培养基中添加0.45-0.52mg BA、28-32g碳源以及0.4-0.6g氮源制成，所述体细胞胚诱导培养基的pH为5.6-6.0，所述碳源是选自葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖以及山梨醇中的任意一种，所述氮源是选自椰汁、酵母提取物、水解酪蛋白以及水解乳蛋白中的任意一种。
2.根据权利要求1所述的五味子体细胞胚的培养方法，其特征在于，所述体细胞胚诱导培养的条件是：温度为23-27℃、通气量为0.15-0.25vvm的条件下暗培养28-30d。
3.根据权利要求1所述的五味子体细胞胚的培养方法，其特征在于，所述前诱导培养包括：
将所述五味子外植体于预培养基上进行预培养，得到五味子愈伤组织；
将所述五味子愈伤组织于胚性诱导培养基上进行胚性诱导培养，得到所述五味子胚性愈伤组织。
4.根据权利要求3所述的五味子体细胞胚的培养方法，其特征在于，所述胚性诱导培养基由每升MS培养基中添加0.8-1.2mg TDZ、0.018-0.22mg ZT、28-32g蔗糖、6.8-7.2g琼脂制成，所述胚性诱导培养基的pH为5.6-6.0，所述预培养基由每升MS培养基中添加2.8-3.2mg2,4-D、0.18-0.22mg TDZ、28-32g蔗糖、6.8-7.2g琼脂制成，所述预培养基的pH为5.6-6.0。
5.根据权利要求4所述的五味子体细胞胚的培养方法，其特征在于，所述预培养是在温度为23-27℃条件下，黑暗培养28-30d；所述胚性诱导培养的条件是：温度为23-27℃、光周期为15-17h、培养时间为28-30d。
6.根据权利要求1所述的五味子体细胞胚的培养方法，其特征在于，按质量体积比为10-15：1的比例，将所述五味子胚性愈伤组织接种至所述体细胞胚诱导培养基中。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的五味子体细胞胚的培养方法，其特征在于，所述五味子外植体为0.4-0.5cm长的五味子茎段。
8.一种用于培养五味子体细胞胚的培养基，其特征在于，其是由每升1/2 MS培养基中添加0.45-0.52mg BA、28-32g碳源以及0.4-0.6g氮源制成的体细胞胚诱导培养基，所述体细胞胚诱导培养基的pH为5.6-6.0，所述碳源是选自葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖以及山梨醇中的任意一种，所述氮源是选自椰汁、酵母提取物、水解酪蛋白以及水解乳蛋白中的任意一种。
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