[发明专利]miRNA-4731-3p作为原发性肺癌诊断标志物的应用

说明书

本发明涉及循环miRNA‑4731‑3p作为原发性肺癌的诊断标志物及其检测方法。通过对已经确诊为肺癌患者的血浆中循环miRNA的种类进行高通量的筛查，并与健康体检者血浆中相应miRNA进行比较，找到表达量较高的MiRNA‑4731‑3p作为该实验的目标标记物。miRNA‑4731‑3p的表达水平明显高于对照组P＜0.001。ROC曲线分析显示miRNA‑4731‑3p鉴别正常人与肺癌患者的效能AUC＝0.048，灵敏度为95.0％，特异度为57.5％。生存曲线分析显示，表达量越高生存期限越短，相反，表达量越低生存期限越长。

技术领域

本发明属于医学诊断技术领域，涉及miRNA-4731-3p作为原发性肺癌的诊断标志物的用途。

背景技术

全球每年有超过100万人死于肺癌，在所有恶性肿瘤相关性死亡中排第一位，其中80％属于非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)。在中国，2009年肺癌以53.57/10万人的发病率和45.57/10万人的死亡率高居恶性肿瘤的首位。虽然近年来肺癌诊断和治疗技术不断进步，肺癌患者5年生存率由15％上升到16.8％，但仍是预后最差的肿瘤之一。肺癌患者还呈现年轻化趋势，在早几年前，肺癌患者，大多在55岁以上，45岁以下的很少，但是，近几年来，45岁以下的肺癌患者陆续出现。因此，肺癌已经严重影响威胁我国人民的生命健康。约有80％的肺癌患者在获得诊断时，已经是手术难以切除的局部晚期或进展期疾病。虽然目前仍没有非常有效的治疗手段，但早期NSCLC的治疗已取得较大的进步，其中以手术为主的综合治疗可以明显延长Ι期NSCLC患者的生存期，5年生存率达到45％-65％。因此早期发现肺癌可以减少肺癌的死亡率，但是目前还没有一种非常安全有效的方法对肺癌高危人群进行筛查，以往的肺癌标记物如细胞角蛋白21-1、肿瘤多糖、癌胚抗原诊断肺癌的敏感度较低。有研究报道影像学检查发现的肺部结节，大约50％是良性的，对减少肺癌死亡率作用有限。此外，超声气管内镜下活检、肺穿刺活检为有创检查方式。而microRNA(miRNA)的出现为准确早期诊断肺癌开辟了新的道路，作为一种非侵入性的诊断方法，越来越多有关于血液循环中的miRNA在癌症诊断中的应用的研究得以开展。

MicroRNA是一类内源性、非编码、具有调控功能的小分子RNA，通过与目标mRNA互补配对导致mRNA降解或抑制转录后翻译诱导基因沉默。MiRNA参与生命过程中一系列的重要进程，包括发育、造血、器官形成、凋亡和细胞增殖，以及癌症的发生、发展，其通过切割靶mRNA或抑制靶mRNA翻译实现miRNAs抑制基因表达。最近研究发现，血清/血浆中有大量稳定存在的miRNA，并且可作为肺癌的诊断标记物。miRNA在肿瘤发生中的作用主要在于3个方面:1)有些miRNA在正常组织表达下调，在肿瘤组织表达上调，可能起着癌性miRNA的作用；2)有些miRNA则在正常组织表达上调，在肿瘤组织表达下调，可能起着抑癌miRNA的作用；3)一些致癌病毒编码的miRNA也可能参与相关肿瘤的发生。其介导肿瘤生物学调控作用机制主要是：一部分miRNA抑制靶基因的表达，作用于各种引起细胞增殖分化的基因；另一部分miRNA类似于抑癌基因，其在肿瘤细胞中的降低，或功能缺失后引起细胞的恶性转变。检测相关miRNA不仅可以优化肿瘤诊断和个体化治疗，而且可以作为判断疾病预后的工具。研究发现肺癌发生发展过程中有些microRNA含量上升，有些microRNA含量下降，异常表达的microRNA对于肺癌的发生发展有着重要意义，可为肺癌诊断提供重要依据。

发明内容

本发明首先是在临床常规收集已经确诊的原发性肺癌患者血浆样本为实验组，收集来院体检的健康人血浆为对照组。高通量筛查出差异明显的microRNA作为目标标记物。利用RT-qPCR技术检测实验组与对照组目标microRNA的表达量，并进行分析对比。

本发明的一个方面涉及miRNA-4731-3p作为原发性肺癌的诊断标志物的用途，所述miRNA-4731-3p的碱基序列为CACACAAGUGGCCCCCAACACU。

本发明的另一个方面涉及miRNA-4731-3p用于制备肺癌预后判断试剂的用途。