[发明专利]一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法

说明书

发明公开了一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法，包括以下步骤：提取：将斑唇马先蒿全草干燥后粉碎，再进行筛选，并在第一预定温度下用乙醇溶液回流提取，将提取液减压浓缩后得到粗提物，富集：将提取步骤中得到的粗提物用去离子水溶解后，再用乙酸乙酯溶液萃取除去小极性化合物，并将剩余部分进行过柱操作。本发明通过采用在线DPPH‑HPLC抗氧化活性成份筛选方法和采用高速逆流色谱仪的配合使用，使斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法非常便捷和迅速，从而缩短了斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离的时间，提高了生产效率，且节省了工艺中所使用有机溶剂的量，从而节省了生产成本。

技术领域

本发明涉及物质分离技术领域，具体为一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法。

背景技术

斑唇马先蒿，玄参科马先蒿属低矮草本，仅偶然升高，全身少毛。根束生，几不增粗，长者可达15厘米，下端渐细成须状。叶基出与茎出，常成密丛，有长柄，柄在基叶中较长，1-2厘米，在茎叶中较短，下半部常多少膜质膨大，时有疏长缘毛，叶片羽状浅裂至深裂，有时最下方之叶儿为全缘，披针形至狭长圆形，两面无毛，背面网脉显明而细，常有疏散的白色肤屑状物，裂片5-9对，有重锯齿，齿常有胼胝而反卷。花均腋生，有短梗；萼管状，长11-15毫米，前方开裂约至2/5，裂口多少膨膨，无毛，仅有极微的缘毛，脉约15条，其中仅2条较粗，然亦细弱，仅近管端处略有网结，齿2枚，有短柄，多少掌状开裂，裂片有少数之锯齿。

斑唇马先蒿中有六种抗氧化活性物质，传统的将这六种抗氧化活性物质分离的方法过程复杂，且需要的时间长，且在工艺过程中需要大量的有机溶剂，且分离成本高，效率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法，以解决传统的将这六种抗氧化活性物质分离的方法过程复杂，且需要的时间长，且在工艺过程中需要大量的有机溶剂，且分离成本高，效率低的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种斑唇马先蒿中六种抗氧化活性成份的筛选及分离方法，包括以下步骤：

S1、提取：将斑唇马先蒿全草干燥后粉碎，再进行筛选，并在第一预定温度下用乙醇溶液回流提取，将提取液减压浓缩后得到粗提物；

S2、富集：将提取步骤中得到的粗提物用去离子水溶解后，再用乙酸乙酯溶液萃取除去小极性化合物，并将剩余部分进行过柱操作，用不同浓度的乙醇溶液对分离柱进行洗脱，得到洗脱液，将所述洗脱液减压浓缩，以得到含有目标成分的富集物；

S3、分离纯化：(1)、采用在线DPPH-HPLC抗氧化活性成份筛选方法从斑唇马先蒿富集物中筛选出6个具有明显抗氧化活性的化合物；

其中，在线抗氧化筛选条件，采用Agilent 1100(250×4.6mmi.d.，5μm)反相色谱柱，流动相为甲醇溶液，甲醇的质量浓度为45-50％，梯度洗脱时间为0-45min，流动相流速为1ml/min，检测波长330nm，DPPH溶液用浓度25μg/ml的甲醇溶解，流动相流速为0.45ml/min，检测采用Agilent 1260，DPPH反应环长度15m，检测波长为517nm；

(2)、采用高速逆流色谱仪分离纯化出了这6种高纯度单体化合物：boschnaloside、alyssonoside、leucosceptosideA、isoverbascoside、leucosceptoside B和verbascoside；

其中，在通过高速逆流色谱仪进行分离时，在第二预定温度采用乙酸乙酯一正丁醇一水容积系统进行洗脱。

优选的，所述提取步骤中，筛选时，选用筛孔范围为20-100目筛，且斑唇马先蒿全草与乙醇溶液的料液比为1:3-1:30，且使用乙醇溶液中乙醇的质量浓度为0％-90％，且第一预定温度为20℃-80℃，且提取次数为1-5次，每次提取0.5h-3h。